Tests d'urine et de salive pour la tuberculose

La variété des différents tests de dépistage de la tuberculose s’explique non par la facilité de diagnostic de cette maladie, mais par sa ruse. Depuis les temps les plus reculés, les chercheurs ont essayé de trouver un moyen d'identifier la phthisie à un stade précoce et ont donc mené diverses études sur des patients, dont certains s'étaient vraiment habitués à diagnostiquer une maladie ou à observer l'évolution de la maladie.

A quoi servent les tests d'urine et de salive?

Un test en cuve de la tuberculose de la salive et de l'urine est effectué pour détecter la présence d'un agent pathogène dans le corps. Dans le même temps, le but de ces études est plus susceptible de confirmer la maladie avec les symptômes existants et non de la trouver, car il existe de nombreuses méthodes plus fiables pour le diagnostic préventif initial.

En outre, les médecins peuvent effectuer un test d'urine ou d'expectoration, ainsi qu'une analyse de la salive pour détecter la tuberculose, afin d'identifier le processus de transition de la forme fermée à la maladie, qui se caractérise par la libération d'un grand nombre de bacilles contenant des fluides naturels et les selles du patient, devenant ainsi très dangereux pour les autres.

Test d'urine

La réponse à la question de savoir comment passer un test de dépistage de la tuberculose dans les urines est assez simple. L’urine pour la tuberculose est collectée comme toute analyse générale de ce fluide, familier à tous dès l’enfance:

  1. Le matin, il est nécessaire de collecter la première portion d'urine, tout en ne collectant que la partie centrale, et non celle qui passe en premier ou en dernier.
  2. Avant la collecte, il est nécessaire de bien laver le récipient et les organes urinaires eux-mêmes, afin que rien ne puisse pénétrer dans le pot: protéines, sang, germes, etc.
  3. La quantité requise de liquide pour l'étude de seulement 50-100 ml, donc vous ne devriez pas apporter une boîte d'urine d'un demi-litre.

L'OAM peut être pris dans n'importe quelle clinique, cependant, les bacilles de la tuberculose ne peuvent être trouvés que dans des laboratoires spéciaux qui ne sont pas disponibles dans toutes les localités de Russie. Les résultats normaux de cette enquête sont les suivants:

  1. Couleur: jaune, jaune ensoleillé ou paille.
  2. Transparence: haute.
  3. Odeur: flou.
  4. Réaction du pH: 4–7.
  5. Densité: 1012–1022 g / l.
  6. Protéines: non, mais parfois jusqu'à 0,033 g / l est acceptable.
  7. Glucose: jusqu'à 0,8 mmol / l.
  8. Corps cétoniques: non.
  9. Bilirubine: non.
  10. Urobilinogène: 5–10 mg / l.
  11. Hémoglobine: non.
  12. Érythrocytes: chez les femmes, la valeur maximale autorisée va jusqu'à trois, et chez les hommes, jusqu'à un est en vue.
  13. Leucocytes: le nombre autorisé de corps dans le champ de vision va jusqu'à 6 chez les femmes et jusqu'à 3 chez les hommes.
  14. Cellules épithéliales: jusqu'à 10 pcs. en vue.
  15. Cylindres: aucun ou simple hyaline présent.
  16. Sel: non
  17. Bactéries: non.
  18. Champignons: non.
  19. Les parasites: non, mais s'il y en a, alors ce n'est pas effrayant: juste dans ce cas, un traitement avec des médicaments anthelminthiques est effectué.

Les taux d'OAM pour la tuberculose restent généralement les mêmes. La seule exception concerne les formes aiguës de la maladie, lorsque les changements dans l'urine dus à une perturbation des organes internes, ainsi que les lésions chroniques des poumons ou des os, lorsqu'il peut y avoir des signes d'amyloïdose dans l'analyse - une violation du métabolisme des protéines, dans laquelle les résultats de l'examen contiendront des protéines.

L'exception est la tuberculose des reins ou des voies urinaires - la forme extrapulmonaire la plus courante de la maladie, causée par le transfert de l'infection à partir de la circulation sanguine, dans laquelle l'analyse d'urine à la tuberculose varie considérablement. Dans ce cas, les phénomènes suivants sont observés:

  • réaction fortement acide persistante;
  • leucocyturie - leucocytes dans l'urine;
  • protéinurie - protéine dans l'urine;
  • érythrocyturie - sang dans les urines;
  • pyurie - pus dans l'urine.

De plus, dans la forme aiguë de la maladie ou lors de la tuberculose des reins et des voies urinaires dans les urines, il existe une forme active des bacilles de l'agent pathogène, qui est déterminée par la méthode de coloration selon Zil-Nelson.

Test de la salive

En fait, l'alcoolémie ne produit pas d'analyse de la salive pour la tuberculose. L'analyse de la salive consiste souvent à méconnaître ce que l'on appelle l'étude des expectorations pour la tuberculose. Au lieu d'un test d'expectoration, l'analyse de la salive pour la tuberculose ne peut être effectuée que dans le cas de très petits nouveau-nés qui ne sont pas capables de cracher l'expectorant car il avale automatiquement immédiatement après l'expectoration. Cependant, dans ce cas, les médecins effectuent simplement une biopsie du tissu ou retirent la sécrétion pulmonaire à l'aide d'une sonde et ne fourmillent pas de salive.

L'analyse des expectorations de l'agent pathogène est également effectuée à l'aide de la méthode de Ziehl-Nelson. En plus des bacilles, on peut observer à l'œil nu certains signes de pathologie pulmonaire: plâtres fibreux, pus, sang, morceaux de tissu et soi-disant lentilles - grandes inclusions avec une tête d'épingle ou une forme arrondie plus petite, dans lesquelles se trouvent généralement un nombre considérable de bacilles.

Méthode de coloration Ziehl-Nelson

La méthode de coloration Ziel-Nelson est basée sur la résistance à l'acide de Mycobacterium tuberculosis, qui ne peut être colorée que par traitement thermique. Au cours de cette étude, les tissus corporels, les expectorations, l'urine, le sang ou toute autre substance nécessitant une analyse visant à détecter la présence de MBT sont laissés dans un environnement favorable à la plantation de bacilles destinés à la reproduction, s'ils sont présents, puis chauffés et colorés. Après cela, tout est maintenu dans l'acide jusqu'à la décoloration et à nouveau peint sans chauffer à une autre couleur. De ce fait, le bureau est assez facile à détecter, car ils restent les couleurs de la première coloration et se détachent bien du fond.

Carnet de Phthisiologie - Tuberculose

Tout ce que vous voulez savoir sur la tuberculose

Analyses de sang et d'urine pour la tuberculose

V.A. Koshechkin, Z.A. Ivanova

En règle générale, les éléments du sang rouge ne changent pas beaucoup avec la tuberculose. L'anémie peut être observée seulement après une perte aiguë de sang dans les poumons ou les intestins. Une légère diminution de l'hémoglobine peut être observée dans les formes chroniques de tuberculose pulmonaire fibro-caverneuse.

L'un des indicateurs de l'activité du processus tuberculeux est la vitesse de sédimentation des érythrocytes. La RSE accélérée est en corrélation non seulement avec l'activité et l'ampleur du processus récent, mais également avec l'exacerbation des processus chroniques, en particulier les fibromes caverneux.

Les éléments de la fraction leucocytaire du sang réagissent plus activement au processus tuberculeux.
Classiquement, il existe trois phases de modifications de la fraction sanguine leucocytaire associées à la nature des lésions dans la tuberculose pulmonaire.
1. La phase neutrophile de la lutte. Dans le sang, la proportion de neutrophiles augmente, ce qui entraîne un décalage de la formule vers la gauche. Les éosinophiles sont absents, le nombre de lymphocytes et de monocytes est réduit.
2. Phase monocyte - surmonter l'infection. Dans le sang, le nombre de lymphocytes est augmenté, la formule sanguine est décalée vers la gauche, le nombre de neutrophiles est réduit, des éosinophiles uniques sont détectés.
3. Récupération de phase. La proportion de lymphocytes et d’éosinophiles est augmentée. Les numérations sanguines se normalisent progressivement.
Cette séparation en phases ne reflète que la réaction sanguine globale.

Changement de neutrophile nucléaire dans la tuberculose
En plus des facteurs quantitatifs, un groupe de neutrophiles a une caractéristique qualitative beaucoup plus fine et indique plus tôt divers processus pathologiques.

La tuberculose chez l'adulte est généralement un processus secondaire, le plus souvent elle ne provoque qu'une augmentation du nombre de neutrophiles dans le sang. Avec des formes infiltrantes et pneumoniques prononcées et des phénomènes de désintégration du tissu pulmonaire, le décalage des neutrophiles vers la gauche est clairement révélé et peut atteindre jusqu'à 20-30% de la bande centrale.

L'infiltrat pulmonaire ne se désintègre pas et les formes focales de la tuberculose au cours de la période de leur première détection ou exacerbation à une température sous-fébrile et des troubles fonctionnels de bas grade donnent un décalage moins prononcé. Cependant, les éléments restants de l'hémogramme peuvent ne pas détecter du tout les anomalies. Par conséquent, une définition approfondie du transfert nucléaire revêt une importance particulière dans la tuberculose.

La doctrine du transfert nucléaire des neutrophiles a été avancée par Arnet (1905) sur la base d'une étude du sang dans diverses infections, dont la tuberculose.

En effectuant des calculs complexes comportant de nombreux croquis, Arneth remarqua une certaine régularité dans la configuration des noyaux de neutrophiles.

Le sang d'une personne en bonne santé contient:

  • 5% de neutrophiles avec des bannières non diluées, noyau non segmenté (classe I);
  • 35% de neutrophiles avec deux segments reliés par une constriction en forme de fil (classe II);
  • 41% de neutrophiles à trois segments (classe III);
  • 17% de neutrophiles à quatre segments (classe IV);
  • 2% de neutrophiles à cinq segments (classe V).

En plus de la segmentation du noyau, Arnet a pris en compte sa forme. Ainsi, pour la première classe, il a distingué plusieurs sous-classes en fonction du degré d'indentation du noyau non segmenté. Les classes restantes sont divisées en sous-classes en fonction de la forme des segments.

Dans les infections proportionnellement à leur gravité, le nombre de formes multi-segmentées diminue, le nombre de formes faiblement segmentées (2-3 segments) et non segmentées (cellules relativement jeunes) augmente.

Dans le schéma d’Arneth, le nombre de neutrophiles de classe I non segmentés est indiqué à gauche; à droite, le nombre de cellules de classe II est situé, puis de classe III, et ainsi de suite.

Analyse d'urine
L'excrétion urinaire chez les patients tuberculeux est presque normale. Les changements pathologiques dans l'urine peuvent être la défaite de la tuberculose des reins ou des voies urinaires.
Chez les patients présentant des formes chroniques de tuberculose pulmonaire, des signes d’amylose peuvent être détectés.

3.7 Analyse de sang et d'urine.

En règle générale, les éléments du sang rouge ne changent pas beaucoup avec la tuberculose. L'anémie peut être observée seulement après une perte aiguë de sang dans les poumons ou les intestins. Une légère diminution de l'hémoglobine peut être observée dans les formes chroniques de tuberculose pulmonaire fibro-caverneuse. L'un des indicateurs de l'activité tuberculeuse est la RSE (vitesse de sédimentation des érythrocytes). La RSE accélérée est en corrélation non seulement avec l'activité et l'étendue du processus récent, mais également avec l'exacerbation de processus chroniques, en particulier de processus fibro-caverneux. Les éléments de la fraction leucocytaire du sang réagissent plus activement au processus tuberculeux.

Classiquement, il existe trois phases de modifications de la fraction sanguine leucocytaire associées à la nature des lésions dans la tuberculose pulmonaire:

  1. Neutrophilic - la phase de la lutte. Dans le sang, la proportion de neutrophiles augmente, ce qui entraîne un déplacement de la formule sanguine vers la gauche. Les éosinophiles sont absents, le nombre de lymphocytes et de monocytes est réduit. La lymphopénie est caractéristique des formes évolutives de tuberculose.
  2. Phase monocytaire - infection surmontée. Dans le sang, le nombre de lymphocytes est augmenté, la formule sanguine est décalée vers la gauche, le nombre de neutrophiles est réduit, des éosinophiles uniques sont détectés.
  3. Phase de récupération La proportion de lymphocytes et d’éosinophiles est augmentée. Les numérations sanguines se normalisent progressivement.

Une telle division en phases ne reflète que les réactions générales du sang, qui ne reflètent pas toute la complexité des réactions du sang à une infection tuberculeuse chronique.

Transfert de neutrophiles nucléaires dans la tuberculose.
En plus des facteurs quantitatifs, un groupe de neutrophiles a une caractéristique qualitative beaucoup plus fine et indique plus tôt divers processus pathologiques. La tuberculose chez l'adulte, généralement le processus post-primaire, ne provoque le plus souvent qu'une augmentation du nombre de neutrophiles dans le sang. Avec les formes infiltrantes-pneumoniques prononcées et le phénomène de désintégration du tissu pulmonaire, le décalage des neutrophiles vers la gauche est révélé très clairement et peut atteindre 20 à 30% de la sensibilité.

L'infiltrat pulmonaire sans désintégration et les formes focales de la tuberculose au cours de la période de leur première détection ou exacerbation à une température sous-fébrile et des troubles fonctionnels de bas grade provoquent un décalage moins prononcé. Dans le même temps, les éléments restants de l'hémogramme peuvent être complètement dépourvus d'anomalies. Par conséquent, une définition approfondie du transfert nucléaire acquiert une valeur diagnostique dans la tuberculose.
Arneth (Arneth) a avancé l'étude du transfert nucléaire neutrophilique à partir d'une étude du sang dans diverses infections et en particulier dans la tuberculose. En effectuant des calculs complexes comportant de nombreux croquis, Arneth remarqua une certaine régularité dans la configuration des noyaux de neutrophiles. Dans le sang d'une personne en bonne santé, les neutrophiles avec des bannières non diluées, le noyau non segmenté (classe I) représentent 5%; neutrophiles avec deux segments reliés par une constriction filiforme (classe II) - 35%, classe III - 41%, classe IV - 17% et classe V - 2%. Dans les infections proportionnellement à leur gravité, le nombre de formes segmentées diminue, le nombre de formes peu segmentées (2-3 segments) et non segmentées augmente. Dans le schéma d'Arneth, le nombre de neutrophiles non segmentés est écrit à gauche; à droite, le nombre de cellules de classe II, puis de classe III, et ainsi de suite.. Par conséquent, avec une augmentation des formes non segmentées et moins segmentées, le nombre de cellules dans la partie gauche du circuit augmente et un "décalage à gauche" se produit.

Les signes d’un processus tuberculeux, en plus des modifications de l’hémogramme, sont une hyponatrémie. C'est le changement métabolique le plus caractéristique. La cause de l'hyponatrémie est le développement d'une substance antidiurétique affectée par la tuberculose pulmonaire. De manière particulièrement intensive, cette substance est produite à l’époque des formes courantes de destruction de cas.

Analyse d'urine
L'excrétion urinaire chez les patients tuberculeux est presque normale. Les changements pathologiques dans l'urine peuvent être la défaite de la tuberculose des reins ou des voies urinaires. Les protéines, les leucocytes et la MBT sont détectés dans les urines. Chez les patients atteints de tuberculose chronique des poumons ou des os, des signes d’amylose peuvent être détectés (pururie résistante, hématurie macroscopique).

Diagnostic de la tuberculose dans l'analyse du sang et de l'urine

En règle générale, les éléments du sang rouge ne changent pas beaucoup avec la tuberculose. L'anémie peut être observée seulement après une perte aiguë de sang dans les poumons ou les intestins. Une légère diminution de l'hémoglobine peut être observée dans les formes chroniques de fibroa tuberculose pulmonaire caverneuse.

L'un des indicateurs de l'activité du processus tuberculeux est la vitesse de sédimentation des érythrocytes. La RSE accélérée est liée non seulement à l'activité et à l'ampleur du processus récent, mais également à l'exacerbation des processus chroniques, en particulier les processus fibrocaverneux.

Les éléments de la fraction leucocytaire du sang réagissent plus activement au processus tuberculeux.

Classiquement, il existe trois phases de modifications de la fraction sanguine leucocytaire associées à la nature des lésions dans la tuberculose pulmonaire.

  1. Phase de lutte neutrophile. Dans le sang, la proportion de neutrophiles augmente, ce qui entraîne un décalage de la formule vers la gauche. Les éosinophiles sont absents, le nombre de lymphocytes et de monocytes est réduit.
  2. Phase monocytaire - infection surmontée. Dans le sang, le nombre de lymphocytes est augmenté, la formule sanguine est décalée vers la gauche, le nombre de neutrophiles est réduit, des éosinophiles uniques sont détectés.
  3. Phase de récupération La proportion de lymphocytes et d’éosinophiles est augmentée. Les numérations sanguines se normalisent progressivement.

Cette séparation en phases ne reflète que la réaction sanguine globale.

Changement de neutrophile nucléaire dans la tuberculose

En plus du quantitatif, le groupe des neutrophiles a une caractéristique qualitative, qui est beaucoup plus mince et indique plus tôt une variété de processus pathologiques.

La tuberculose chez l'adulte est généralement un processus secondaire, le plus souvent elle ne provoque qu'une augmentation du nombre de neutrophiles dans le sang. Avec des formes infiltrantes et pneumoniques prononcées et des phénomènes de désintégration du tissu pulmonaire, le décalage des neutrophiles vers la gauche est clairement révélé et peut atteindre jusqu'à 20-30% de la bande centrale.

L'infiltrat pulmonaire ne se désintègre pas et les formes focales de la tuberculose au cours de la période de leur première détection ou exacerbation à une température sous-fébrile et des troubles fonctionnels de bas grade donnent un décalage moins prononcé. Cependant, les éléments restants de l'hémogramme peuvent ne pas détecter du tout les anomalies. Par conséquent, une définition approfondie du transfert nucléaire revêt une importance particulière dans la tuberculose.

La doctrine du transfert nucléaire des neutrophiles a été avancée par Arnet (1905) sur la base d'une étude du sang dans diverses infections, dont la tuberculose.

En effectuant des calculs complexes comportant de nombreux croquis, Arneth remarqua une certaine régularité dans la configuration des noyaux de neutrophiles. Le sang d'une personne en bonne santé contient:

  • 5% de neutrophiles avec des tranches non diluées, noyau non segmenté (classe I);
  • 35% de neutrophiles avec deux segments reliés par une constriction en forme de fil (classe II);
  • 41% de neutrophiles à trois segments (classe III);
  • 17% de neutrophiles à quatre segments (classe IV);
  • 2% de neutrophiles à cinq segments (classe V).

En plus de la segmentation du noyau, Arnet a pris en compte sa forme. Ainsi, pour la classe, il a distingué plusieurs sous-classes en fonction du degré de dépression du noyau non segmenté. Les classes restantes sont divisées en sous-classes en fonction de la forme des segments.

Dans les infections, proportionnellement à leur gravité, le nombre de formes multisegmentées diminue, le nombre de formes faiblement segmentées (2 à 3 segments) et non segmentées (cellules relativement jeunes) augmente. Dans le schéma d’Arneth, le nombre de neutrophiles de classe I non segmentés est indiqué à gauche; à droite, le nombre de cellules de classe II est situé, puis de classe III, etc. Et par conséquent, avec une augmentation des formes non segmentées et des formes peu segmentées, le nombre de cellules dans la partie gauche du circuit augmente et il se produit un "décalage à gauche".

Analyse d'urine

L'excrétion urinaire chez les patients tuberculeux est presque normale. Les changements pathologiques dans l'urine peuvent être la défaite de la tuberculose des reins ou des voies urinaires.

Chez les patients présentant des formes chroniques de tuberculose pulmonaire, des signes d’amylose peuvent être détectés.

35. Valeur diagnostique des tests sanguins et urinaires chez les patients atteints de tuberculose.

Analyse de sang Dans la plupart des cas, l'hémoglobine et les globules rouges restent inchangés, à l'exception des cas accompagnés d'une perte de sang aiguë. Le taux de sédimentation des érythrocytes est un indicateur de la présence d’un processus tuberculeux actif. La RSE accélérée est caractéristique non seulement de la tuberculose active fraîche, mais également de l'exacerbation du processus chronique. Les autres indicateurs du test sanguin varient considérablement en fonction de la nature de la lésion pulmonaire. Changements d'indicateurs sang quand tuberk. dépourvu de spécificité, cependant, l’hémogramme aide au diagnostic. phase de tuberk. traiter et évaluer le fardeau. son flux. Personnes interrogées pour tuberculose et patients tuberculeux. assigné au coin commun. prise de sang avec la définition de l'ESR, contenu eritr. et leucose, concentration en hémoglob. et calcul de la formule des leucocytes. Les patients atteints de tuberculose en présence de pyémie recommandée. déterminer le nombre de réticulocytes pour évaluer la régénération. capacités de la moelle osseuse, dans les cas de diagnostic différentiel - nombre de plaquettes. Changements d'hématologue. Les indicateurs dépendent, d’une part, de la localisation, de la nature et de la gravité de la maladie. processus, d'autre part - de l'état du corps, ses réserves compensatoires. Hémogramme har. plutôt une phase du processus que son coin. forme. Par exemple, chez les patients présentant des formes communes destructrices de tuberculose avec un processus de compensation et l'absence d'inflammation récente. Les modifications de l'image du sang peuvent être normales. Affûtage des tubes. le processus s'accompagne généralement d'un changement de direction neutrophile, d'une lymphopénie et d'une augmentation de la RSE. Total le contenu des leucocytes na. la plupart des patients dans la plage normale. Seule l'évolution aiguë et sévère est caractérisée par une augmentation du contenu des leucocytes dans le sang à 15 x 109 / l. Le décalage neutrophile de la formule leucocytaire à gauche en même temps devient plus significatif. Dans les cas graves de la maladie (particulièrement dans la tuberculose miliaire), une réaction myéloïde leucémoïde peut survenir. Le soulagement du processus aigu provoque la normalisation de ces changements, l'apparition de la lymphocytose. La neutropénie et la lymphocytose peuvent être observées dans les cas de tuberculose hématogène disséminée et focale chronique.

Analyse d'urine Dans l'analyse de l'urine chez un patient atteint de tuberculose pulmonaire, il n'y a pas de déviation notable par rapport à la norme. Les modifications apparaissent uniquement dans les lésions tuberculeuses des reins et des voies urinaires. Une analyse d'urine systématique pour la tuberculose n'est pas seulement nécessaire si l'on soupçonne des dommages aux reins. Dans le dernier cas il est un. pour un diagnostic précoce. La présence persistante de pus dans les urines et surtout dans le tuba. les bactéries, bien sûr, pointe vers la baignoire. les reins. Cependant, il est parfois nécessaire de répéter. Issled. urine pour détecter le pathologiste. trouve; donc avec certains. formes de tuberculose test d'urine mensuel (forme disséminée, complexe primaire complexe.). Petits changements dans l'urine sous forme de traces de protéines, simples. les leucocytes et les érythrocytes frais peuvent être détectés périodiquement comme des phénomènes d'intoxication générale. Enfin, certaines réactions avec l'urine donnent des indications sur la gravité du processus. Parmi eux, l'apparition de réactions diazo lors de la généralisation. formes de tuberculose, en particulier avec la tuberculose miliaire.

Sans aucun doute, la valeur pronostique au cours de la tuberculose a solution urochromogène. C'est très simple, et c'est son grand avantage. Elle est fabriquée. ensuite manière: prenez l’urine filtrée et diluez-la 10 fois. Verser dans deux tubes, l'un servant de témoin, et ajouter une solution de permanganate de potassium 1: 1000. Une réaction positive dans le tube provoque une forte coloration des canaris, qui se voit très clairement par rapport au témoin. Il est nécessaire de prendre en compte que bien exprimé. coloration. Le mécanisme de la réaction est que le permanganate de potassium oxyde l’urrochromogène incolore dans l’urine, ce qui est significativement plus élevé en cas de tuberculose évolutive.

Quels sont les tests pour la tuberculose pulmonaire?

Les tests de laboratoire réussissent tous les patients. Etant donné que la pathologie est contagieuse pour les autres, l’étude opportune du matériel biologique contribue à l’exactitude du diagnostic et à la maîtrise du déroulement du traitement.

Liste des tests de laboratoire pour la tuberculose pulmonaire

Liste des tests de tuberculose

La liste des tests obligatoires pour la tuberculose pulmonaire est la suivante:

  • examen des expectorations - on y trouve des cavités, des corps de riz, des protéines, des fibres élastiques, des sels de calcium;
  • analyse de l'exsudat - montre les neutrophiles et les cellules endothéliales avec une prédominance de leucocytes;
  • l'analyse du lavage broncho-alvéolaire montre un nombre réduit de macrophages alvéolaires avec une forte augmentation de neutrophiles avec un déroulement actif du processus de la tuberculose et avec un cours inactif d'indicateurs de macrophages légèrement augmenté;
  • les tests sérologiques, ou tests immunoenzymatiques, sont testés pour la détermination des immunoglobulines sériques des antigènes mycobactériens. Le rapport du titre d'anticorps de diagnostic sur l'agent responsable de la maladie dépasse la valeur de 1: 8.

Que montrent les résultats des tests sanguins?

Grâce à l'analyse biochimique du sang dans la tuberculose pulmonaire, les spécialistes ont la possibilité de déterminer la directionnalité des modifications des protéines et de leurs fractions dans le sérum sanguin. Cela détermine la forme et le stade de la maladie. Les niveaux d'acide urique, de cuivre, de cholestérol et de lysozyme sont dépassés. L'activité de la créatine kinase et de l'enzyme de conversion de l'angiotensine est observée. L'acidose respiratoire se développe en raison d'une diminution du pH et d'une augmentation de la pCO2.

En ce qui concerne l'hémoglobine, leur réduction, entraînant l'apparition d'une anémie, n'est pas typique du processus de la tuberculose.

Analyse d'urine chez les patients tuberculeux

Est-ce que les tests d'urine pour la tuberculose pulmonaire?

L'excrétion urinaire chez les patients tuberculeux reste normale. Les modifications pathologiques surviennent généralement lorsque les reins et les voies urinaires sont impliqués dans le processus tuberculeux. Chez les patients atteints d'une forme chronique de la maladie, des signes d'amylose peuvent être détectés au cours de l'étude.

Qu'est-ce que l'analyse de l'urine pour la tuberculose pulmonaire, quelles informations peuvent indiquer le développement dans le corps du processus pathologique?

  1. La densité est comprise entre 1 015 et 1 025.
  2. La présence unique d'érythrocytes est autorisée, chez les enfants - pas plus de 5.
  3. Les globules blancs ne doivent pas dépasser 2 unités, pour les femmes et les filles - 5 unités maximum.
  4. La valeur saline ne devrait pas être significative.
  5. La valeur admissible de l'épithélium à plat peut aller jusqu'à 5 unités.

Quel sera le test sanguin pour la tuberculose pulmonaire

La tuberculose est une maladie dangereuse et difficile à traiter. L'efficacité du traitement dépend de la rapidité avec laquelle il a été détecté. Personne n'est assuré contre l'infection, absolument tout le monde peut tomber malade - adultes, enfants, personnes âgées.

En l'absence du traitement opportun et nécessaire, la forme fermée se transforme en une forme ouverte dangereuse. Par conséquent, le diagnostic aux premiers stades de la maladie est extrêmement important et peut être atteint par des examens réguliers et complets.

Dans cet article, nous examinerons diverses méthodes de diagnostic de cette maladie pulmonaire et tenterons également de déterminer quel test sanguin de recherche de la tuberculose pulmonaire est le plus fiable et informatif.

Quand il devient nécessaire de rechercher la tuberculose

Donc, l'examen est nécessaire pour:

  • contact avec des porteurs de la maladie;
  • faiblesse générale;
  • perte de poids;
  • augmentation de la température dans la soirée;
  • toux chronique.

Il est particulièrement important de déterminer à temps la présence de tuberculose chez l'enfant, car il est très probable que chez l'enfant, l'infection entraînera d'autres processus pathologiques dans le corps.

C'est important! L'une des mesures préventives consiste à vacciner le BCG le 4ème jour de la vie d'un enfant et à 7 ans. Le corps de l'enfant étant plus faible que celui d'un adulte, il est donc important de le protéger de l'infection et de procéder à la vaccination.

Recherche de suspicion de tuberculose

La tuberculose peut être détectée de plusieurs manières.


Photo 1. Fragment de radiographie du thorax d'un patient atteint de tuberculose. La fluorographie est l’une des méthodes les plus fiables pour diagnostiquer cette maladie, mais elle est plus efficace en combinaison avec d’autres. Par exemple, un test sanguin détaillé révélera une tuberculose même à un stade précoce.

  1. Examen aux rayons X. La fluorographie aidera à évaluer le degré de lésion pulmonaire. Cependant, il convient de garder à l'esprit que l'image aux rayons X ne montrera pas les stades initiaux de la maladie. L'enquête devrait être complète. Pour un examen plus complet, les poumons du patient doivent être photographiés à la fois de face et de dos.
  2. Test de la tuberculine. Lors de l'examen d'enfants, le test à la tuberculine est le plus souvent utilisé (test de Mantoux). La tuberculine est un mélange de protéines isolées d'agents pathogènes morts. L'introduction du médicament sous la peau provoque une réaction d'immunité qui se manifeste de différentes manières. S'il n'y a pas d'agents pathogènes dans le corps, l'injection laissera une marque à peine perceptible au bout de quelques jours. Avec une inflammation du site d'injection ou la formation d'un abcès, la probabilité d'infection du patient est élevée.

C'est important! Le test de Mantoux ne permet pas de déterminer la présence de la tuberculose avec une probabilité de 100%, cependant, il aidera à déterminer le groupe de risque de la maladie. Avec soin, des tests doivent être effectués sur les personnes souffrant d'allergies. Le corps peut réagir à l'introduction de la composition de manière imprévisible.

  1. Test sanguin Les résultats aident à détecter les traces de l'agent pathogène. Nommé pour identifier le diagnostic final et l'étendue de la maladie.
  2. Composition de la bouche. La présence de Mycobacterium tuberculosis permet d'identifier et d'étudier les expectorations. Le matériau dépasse la norme des indicateurs de protéines, ce qui le distingue des expectorations bronchiques et des agents infectieux.

Est-il possible de détecter la tuberculose par un test sanguin général?

La composition des globules rouges (globules rouges) en présence de bactéries varie légèrement. Les hémorragies intestinales ou pulmonaires aiguës provoquent une anémie, une diminution significative de l'hémoglobine.

Il y a des gens qui doutent qu'il soit possible de déterminer la tuberculose par un test sanguin. En fait, une analyse générale permet d’identifier des processus inflammatoires et pathologiques en développement dans l’organisme en fonction d’un indicateur accru de RSE. L'augmentation du taux indique non seulement l'activité et la durée de l'inflammation actuelle, mais également l'exacerbation des maladies chroniques, en particulier dans les phases finales de la maladie.


Photo 2. Le médecin procède à la collecte du sang de la veine du patient à l'aide d'une seringue. Après cela, un test sanguin sera effectué, avec la tuberculose, dont les indicateurs indiqueront des processus inflammatoires.

C'est important! Les niveaux de RSE peuvent être confondus avec des indicateurs d'inflammation ou de cancer du poumon. Dans ce cas, il est nécessaire d’étudier le nombre d’éosinophiles (l’un des types de globules blancs). Si les éosinophiles sont hypertrophiés et que la formule à base de leucocytes montre des changements spectaculaires dans le test sanguin, cela se produit avec la tuberculose et est exclu avec la pneumonie.

Les analyses de sang cliniques et biochimiques sont-elles précises?

Un test sanguin de tuberculose pulmonaire est souvent insuffisant pour diagnostiquer un bacille tuberculeux. Ensuite, un examen approfondi est nécessaire. On peut en dire autant de l'analyse biochimique du sang. En cas de stade initial de tuberculose ou de forme latente, il est fort probable que le patient ne présentera aucune anomalie. Et ce n’est que dans les formes aiguës de la maladie que le coefficient albumine-globuline sera abaissé.

Types de tests sanguins pour les anticorps anti-tuberculose

Il existe des méthodes d'analyse du sang plus précises et plus approfondies que OAK qui permettent de détecter la tuberculose. Comment déterminer à partir de tels tests sanguins, si vous avez une maladie, envisagez ensuite.

L'établissement d'un diagnostic objectif est possible en utilisant les approches de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) et du dosage immuno-absorbant lié à une enzyme (ELISA).

La méthode ELISA indique-t-elle la présence de tuberculose?

Avec l'aide de l'ELISA, la présence d'anticorps pathogènes chez le patient est détectée. Cette méthode est pratique car elle vous permet d’examiner simultanément un grand nombre d’échantillons. Cependant, sa sensibilité est faible et son utilisation est recommandée dans les zones à faible incidence.

Quels changements la méthode PCR révèle-t-elle?

La méthode PCR est parmi les plus efficaces. Il est utilisé pour identifier la maladie, déterminer la gravité et la rémission pendant le traitement en recherchant l'ADN des microbactéries.

La PCR est utilisée pour:

  • détection de la baguette progressive de Koch;
  • test pour la détection de la tuberculose extrapulmonaire;
  • établissement rapide de foyers pour la localisation de l'infection;
  • diagnostic de récurrence de la maladie;
  • surveiller le déroulement du traitement.

Lui et les autres tests sanguins pour les anticorps anti-tuberculose sont considérés comme très fiables. Mais il y en a d'autres.

Méthodes de test sanguin alternatives

La méthode des tests de libération d'interféron gamma est moins courante que la PCR et l'ELISA pour la détection des microbactéries pathogènes. Il peut être effectué à la place du test à la tuberculine. La réaction indique la formation d'interféron gamma en réponse à l'introduction de microbactéries. Les résultats peuvent déterminer avec précision la présence d'une infection.

QuantiFERON-TB Gold est une autre méthode de recherche alternative. Cette méthode est le plus souvent utilisée pour tester les enfants ayant une forte réaction allergique au test à la tuberculine.

C'est important! Les deux méthodes ne permettent pas de déterminer le degré d'infection - actif ou latent.

Le médecin traitant détermine quel type de test sanguin sera utilisé. Le plus souvent, l'étude est réalisée dans un complexe. Un test sanguin pour la tuberculose latente peut ne pas donner de résultats du tout.

Comment sont les indicateurs de tests sanguins

Lors de l'interprétation d'un test sanguin général, il convient de porter une attention particulière au niveau de la VS, de l'hémoglobine et des leucocytes.

Le niveau d'ESR chez une personne en bonne santé sera inférieur à 50 unités, l'excès de cet indicateur indique le processus inflammatoire dans le corps.

Le nombre de leucocytes dans le sang d'un patient atteint de tuberculose atteint 6 à 10 9 / l, dans les cas aigus et graves du développement de la maladie - 12-15 à 10 9 / l.

La composition des globules rouges dans la plupart des patients reste normale. Une faible teneur en hémoglobine est enregistrée dans la tuberculose miliaire, pneumonie caséeuse.

Les formes aiguës, progressives et compliquées de la maladie modifient le leucogramme. Dans certains cas, une leucocytose modérée est détectée (jusqu'à 10 000-15 000 leucocytes), moins souvent une leucopénie.

Quoi que vous fassiez un test sanguin pour la tuberculose pulmonaire, le déchiffrement est le travail de professionnels expérimentés. Seuls ceux-ci peuvent déterminer avec précision le fonctionnement de la tuberculose, si elle est toujours détectée. Les analyses ELISA et PCR sont décodées de la même manière. Sur les formes spéciales, un résultat négatif ou positif est indiqué en regard de l'infection désignée.

Types de tests pour le traitement

La difficulté du traitement réside dans le fait que l'infection peut devenir résistante à tout type d'antibiotique, en particulier aux stades avancés, ainsi qu'à une longue période d'incubation au cours de laquelle il n'est pas possible de déterminer l'infection.

Après avoir identifié et prescrit le traitement approprié, le processus de guérison est contrôlé à intervalles de 1 à 2 fois par mois. Le patient donne du sang et du flegme.


Photo 3. Table médicale dans le cabinet du médecin après la collecte des expectorations du patient. Les échantillons d'expectorations sont enfermés dans des tubes en plastique et attendent des tests en laboratoire.

Vous pouvez procéder à une numération sanguine complète, à un test de Mantoux, et vous pouvez subir une fluorographie dans presque tous les centres médicaux. Cette procédure est effectuée immédiatement en cas de doute. Sur la base des données obtenues, le thérapeute tirera une conclusion sur l’absence de modifications pathologiques dans le corps ou émettra une demande de consultation pour un examen plus approfondi dans un tubdispanser.

Des études spécialisées et plus précises sont menées dans les dispensaires antituberculeux, dotés des laboratoires et des réactifs nécessaires à la recherche.

Donc, résumant ce qui précède:

  • la tuberculose est une maladie dangereuse qu'il est extrêmement important de détecter à temps;
  • augmentation de l'ESR, assombrissement des poumons, modifications du leucogramme permettent d'envoyer le patient à un examen plus approfondi en vue de la détection d'une infection;
  • le traitement est effectué à l'aide de médicaments antituberculeux; La phase intensive du traitement se poursuit jusqu'à l'obtention d'indicateurs cliniques et radiologiques positifs.

Vidéo utile

Nous proposons de regarder une vidéo, qui répond également à la question de savoir s'il est possible de détecter la tuberculose par un test sanguin. Il décrit plus en détail le test Quantifone TB Gold de QuantiFERON TB Gold, qui apparaît dans l'analyse de la tuberculose sanguine par la réponse immunitaire.

Décrypter une numération sanguine complète de la tuberculose chez l'adulte et l'enfant

L'infection par le bacille tuberculeux n'est plus une phrase pour une personne. La médecine moderne utilise des outils efficaces pour lutter contre cette maladie, si elle est détectée à un stade précoce. Des examens et tests préventifs réguliers, y compris un test sanguin général de la tuberculose, aident à détecter la pathologie à temps.

Changements dans le tableau clinique

La formule sanguine complète de la tuberculose pulmonaire ne présente pas de manifestations spécifiques. Il n'y a pas de marqueur parlant du développement de la tuberculose et déterminant le stade de la maladie. Mais par des signes non spécifiques, on peut juger du processus inflammatoire latent et suspecter des modifications des poumons.

Déviation des globules rouges de la norme

Avec une forme paresseuse ou une lésion localisée, le nombre d'érythrocytes dans le sang ne change pas, mais leur couleur change. Le taux d'hémoglobine dans les érythrocytes est réduit. Cette condition s'appelle l'hypochromie.

Avec des lésions infiltrantes importantes dans le tissu pulmonaire, un test sanguin clinique montre une réduction du nombre de globules rouges, une diminution de leur taille. Les cellules immatures apparaissent - les réticulocytes, qui sont les «précurseurs» des globules rouges. Au stade initial de la tuberculose, le nombre de réticulocytes ne dépasse pas 0,5%.

L'anémie sévère est plus fréquente chez les adultes atteints de tuberculose avancée. Dans le même temps, le nombre de réticulocytes augmente jusqu'à 1% du nombre total de globules rouges.

Déplacement des leucocytes

Les leucocytes en tant que cellules du système immunitaire sont utilisés en réponse à la maladie. Selon un test sanguin général et une étude de leucogramme, la présence du processus inflammatoire et son stade sont déterminés.

Avec la forme fermée non compliquée, il y a une augmentation significative du nombre de neutrophiles - globules blancs responsables de la lutte contre l'infection bactérienne. Les promyélocytes apparaissent - des cellules leucocytaires immatures, qui normalement ne se produisent pas.

La tuberculose pulmonaire longue et dure est accompagnée de modifications dégénératives des neutrophiles et de la formation d'une granularité pathologique. Le nombre d'éosinophiles diminue fortement. Il y a une lymphopénie - une réduction du nombre de lymphocytes. Tous ces signes indiquent un processus inflammatoire prolongé, accompagné de la formation de pus et de masses nécrotiques.

Changement ESR

La détermination de la tuberculose dans sa phase active aide la RSE - un indicateur de la vitesse de sédimentation des érythrocytes. L'accumulation d'immunoglobulines, le fibrinogène, contribue à la précipitation des globules rouges et à leur précipitation rapide. Normalement, ces paramètres sanguins chez l'homme ne dépassent pas 10 mm / h, chez la femme, 15 mm / h. Une accélération de l'ESR jusqu'à 80 mm / h indique l'activation du processus inflammatoire dans le corps.

Caractéristiques des indicateurs chez les enfants

Un test sanguin de dépistage de la tuberculose chez un enfant ne diffère pas beaucoup des modifications chez un adulte. Le décodage du résultat s'effectue sur les mêmes indicateurs:

  • Dans la phase initiale de la maladie, la formule des érythrocytes change légèrement. L'anémie ne peut survenir que sous une forme destructive. Dans d'autres cas, le nombre de globules rouges reste inchangé, tandis que le pourcentage d'érythrocytes immatures augmente. La tuberculose chez les enfants peut être suspectée lorsque les réticulocytes détectés sont supérieurs à 1 ppm.
  • Les indicateurs de leucocytes subissent également des modifications. La leucocytose se développe - une augmentation du nombre total de globules blancs due aux neutrophiles, et le nombre de lymphocytes diminue fortement. À la norme pour les enfants de plus de 6 ans, 40%, le nombre de lymphocytes dans la tuberculose ne dépasse pas 20%.

Aux premiers stades de la maladie, le nombre d’éosinophiles augmente (cellules réagissant à une réaction allergique). Une forte diminution de ceux-ci montre que le processus entre en phase active.

  • Chez l'enfant, l'ESR ne dépasse pas 10 mm / h. Une accélération à 50 mm / h indique la mobilisation des défenses de l'organisme pour combattre le processus inflammatoire.

Chez un enfant, le stade initial de la maladie se produit souvent sans symptômes évidents ou est masqué par un ARVI.

Changements en fonction du stade de la maladie

Est-il possible d'établir de manière fiable la présence d'un foyer tuberculeux à l'aide de tests sanguins en laboratoire? Malheureusement non. La formule sanguine complète de la tuberculose ne permet de détecter le processus inflammatoire qu'à certains stades de la maladie.

  1. Au stade d'infiltration, les leucocytes réagissent légèrement et la RSE augmente.
  2. Au stade de la désintégration, il se produit des changements prononcés dans la formule des leucocytes et des érythrocytes.
  3. La forme diffusée au cours de l'analyse donnera des déviations plus prononcées mentionnées ci-dessus.
  4. Lorsque le processus inflammatoire diminue ou le processus de récupération, le sang rouge revient à la normale, le nombre et le rapport de leucocytes sont restaurés.
  5. Une forme inactive de tuberculose pulmonaire n'est pas détectée par un examen sanguin général.

La détection précoce de la tuberculose devient la clé du succès du traitement. Une numération globulaire complète est une méthode qui permet de détecter le processus inflammatoire latent au fil du temps. Et bien que l'analyse ne soit pas considérée comme une méthode de recherche spécialisée, il est possible de couvrir une grande masse de personnes en peu de temps. En cas de détection d'anomalies dans le tableau clinique caractéristique, une analyse spécifique de la tuberculose et de la fluorographie est prescrite.

Qui a dit qu'il est impossible de guérir la tuberculose?

Vous avez reçu un diagnostic de tuberculose. Vous remplissez toutes les ordonnances du médecin, mais il n'y a pas de récupération. Une poignée de pilules blesse l'estomac, poursuit la faiblesse et l'apathie? Peut-être devriez-vous changer l'approche du traitement.

Les médecins ne peuvent pas vaincre la cause première de votre maladie. Lisez l'histoire d'Helen, qui a réussi à vaincre la tuberculose quoi qu'il arrive. Lire l'article >>

Indicateurs de l'ESR dans la tuberculose

Selon les statistiques actuelles, la tuberculose est la maladie la plus répandue parmi la population. Le plus souvent, cette maladie affecte les enfants et les pauvres. Il est à noter que chaque année, le pourcentage de personnes malades double. A cet égard, de nouveaux médicaments et méthodes sont en cours de développement pour le traitement de la tuberculose.

Le principal facteur contribuant au développement de la tuberculose est la diminution de l’immunité, qui peut être causée par la pollution de l’environnement. Il est possible de diagnostiquer cette maladie à l'aide de tests et de nombreuses autres manières.

Une analyse de sang pour la tuberculose est le principal indicateur pour déterminer la maladie chez l'homme. La tuberculose est une maladie infectieuse dangereuse. Il est à noter qu’à un stade plus avancé de la maladie, il est très difficile de traiter, il est donc très important de détecter la maladie à temps et de commencer un traitement approprié à l’hôpital.

Moyens de contracter la tuberculose

La maladie a un mécanisme de transmission aéroporté. Ainsi, l'infection peut survenir à la suite de l'entrée de l'agent pathogène dans le corps à travers la membrane muqueuse. En outre, la tuberculose peut être transmise par une mère malade à un fœtus en développement.

Dans presque tous les cas, la tuberculose affecte le système respiratoire. Séparer la forme extrapulmonaire de la maladie (affecte le système digestif, le système nerveux central, perturbe la fonction visuelle, les articulations, le système urogénital).

La principale source de la maladie est Mycobacterium - la baguette de Koch. Il affecte les poumons, la peau, les os et de nombreux autres organes. En règle générale, la tuberculose peut entraîner une invalidité, voire la mort. Cependant, si la maladie est diagnostiquée le plus tôt possible, il est alors tout à fait possible de la traiter.

Indicateurs de l'ESR dans la tuberculose

Un test sanguin pour la détermination de la tuberculose montre l'évolution clinique du processus inflammatoire. Normalement, la vitesse de sédimentation des érythrocytes est la suivante: chez l’homme, 1–10 mm / h, chez la femme, entre 2 et 15 mm / h.

L'agent pathogène, pénétrant dans le corps humain, endommage les tissus et les organes de divers systèmes. Y compris les changements dans les numérations sanguines. Ainsi, lorsqu’il est infecté par un bâton, le taux de sédimentation des érythrocytes augmente très fortement. Le nombre de leucocytes augmente également, car le corps a un processus inflammatoire.
En règle générale, la tuberculose ne provoque pas de changements significatifs dans les globules rouges. Le développement d'une petite anémie et d'une faible hémoglobine ne peut se développer qu'avec une perte de sang importante. Ainsi, la tuberculose s'accompagne d'un excès de RSE nettement supérieur à la valeur normale.

Les symptômes

Les principaux symptômes de la tuberculose incluent:

  1. La fièvre;
  2. Sueurs nocturnes;
  3. L'apparition d'essoufflement;
  4. Toux sèche et forte avec expectorations (des traces de sang peuvent être présentes);
  5. Fatigue générale;
  6. Perte de poids dramatique;
  7. Fatigue rapide;
  8. La léthargie;
  9. Agressivité;
  10. Manque d'appétit;
  11. Douleurs à la poitrine.

Les enfants, contrairement aux adultes, sont les plus susceptibles à la tuberculose. Par conséquent, il est nécessaire d’examiner régulièrement votre enfant et de faire un test pour identifier les bâtons de Koch. Un diagnostic opportun vous permet d'obtenir un résultat positif sans conséquences graves.

Certaines personnes ont un système immunitaire fort. Dans ce cas, les symptômes de la maladie ne commencent à apparaître qu’à un stade avancé. Lorsque l'immunité est affaiblie, les symptômes apparaissent au tout début de la maladie.
La tuberculose se développe lentement et progressivement:

  • Forme primaire.
    Développe immédiatement après l'infection. Les principaux symptômes à ce stade sont des ganglions lymphatiques enflés.
  • Latent (forme latente).
    L'apparition de la maladie est caractérisée par l'absence de symptômes. En outre, ils se manifestent par des douleurs spécifiques lors de la respiration et de la toux, un manque d’appétit, une transpiration accrue et une fatigue rapide. Ce formulaire peut être considéré comme non contagieux.
  • Ouvrir le formulaire.
    La forme la plus grave de la maladie. Pour le traitement, il est nécessaire de protéger le malade des autres dans des établissements médicaux fermés. C'est pour assurer la sécurité de leur entourage.
  • Forme secondaire.
    Observé à la suite d'une réinfection.

Diagnostic de la tuberculose

La détection de la maladie est compliquée par la similitude des premiers symptômes de la bronchite chronique. Le principal rôle dans le diagnostic de la tuberculose est la réalisation rapide de tests sur des patients potentiels. Donc, si un patient est suspecté de tuberculose, des recherches sur les expectorations sont menées. Pour ce faire, les expectorations sont collectées pendant la journée et envoyées à un laboratoire pour détecter les mycobactéries.

Il convient de noter que le diagnostic de la tuberculose a d'autres méthodes pour examiner les patients.

Les moyens les plus efficaces pour diagnostiquer la maladie sont les suivants:

  1. Test sanguin B / x;
  2. Analyse d'urine;
  3. Analyse des expectorations;
  4. Test de Mantoux, Pirque;
  5. CT (tomodensitométrie);
  6. Tests sanguins sérologiques (ELISA, PCR);
  7. Bronchoscopie;
  8. Biopsie;
  9. Ponction pleurale;
  10. La fluorographie;
  11. Radioscopie.

Il est à noter que la tuberculose s'accompagne d'une augmentation de la concentration de cholestérol, de lysozyme, d'acide urique et de Cu dans le sérum sanguin. Sur cette base, tous les changements dans la tuberculose peuvent être très spécifiques.

Chaque forme de la maladie diffère par son évolution, sa gravité, son diagnostic et son traitement. Par conséquent, lorsque les premiers symptômes apparaissent, vous devez immédiatement consulter un médecin et ne pas vous soigner vous-même. Puisque vous ne pouvez qu'aggraver la situation et aggraver votre état.

Actuellement, de nombreux médicaments combattent efficacement l'agent responsable de la tuberculose. Un diagnostic opportun et une thérapie compétente jouent le rôle principal dans le rétablissement d'une personne. En outre, l'état général du patient dépend du processus de récupération après la maladie. Ainsi, si vous respectez toutes les recommandations médicales, vous pouvez réduire le risque de réinfection.

Diagnostic de laboratoire de la tuberculose

La tuberculose est une maladie facile à diagnostiquer dans les conditions actuelles et les réalisations scientifiques. Le diagnostic en laboratoire de la tuberculose est au centre des autres méthodes de diagnostic, juste après les méthodes à rayons X.

CBC

Chez les patients atteints de tuberculose, les modifications du test sanguin général ne sont pas pathognomoniques. L'hypochromie des érythrocytes est typique de la tuberculose dans les formes limitées et inactives de la tuberculose. Avec des infiltrats massifs ou une pneumonie caséeuse, avec une lymphadénite caséale étendue, on note des lésions spécifiques de l'intestin, ainsi que des hémorragies pulmonaires ou postopératoires importantes, une érythropénie et une microcytose, une oligochromasie, une polychromasie. La macrocytose, et plus encore la poikilocytose, sont beaucoup moins fréquentes, généralement avec une anémie sévère. Le nombre de réticulocytes avec un stade compensé de tuberculose varie de 0,1 à 0,6%, avec des sous-compensés - de 0,6 à 1,0%, et 1% des réticulocytes sont caractéristiques de la décompensation.

Dans les cas de tuberculose, une leucocytose modérée (jusqu'à 15 000 leucocytes) peut être observée dans certains cas, moins souvent une leucopénie, qui se rencontre dans 2 à 7% des cas chez des patients présentant des formes limitées et faciles du processus et dans 12,5% des cas de tuberculose pulmonaire destructive et progressive..

Le plus souvent, les changements se produisent dans la formule des leucocytes. On note une neutrophilie relative et absolue, ainsi qu'un décalage modéré des leucocytes de la gauche vers les promyélocytes. Les myélocytes sont très rarement rencontrés dans les cas de tuberculose non compliquée. L'augmentation du nombre de neutrophiles présentant une granularité pathologique dans l'hémogramme d'un patient tuberculeux indique toujours la durée du processus: chez les patients atteints de tuberculose sévère, presque tous les neutrophiles présentent une granularité pathologique. Quand une épidémie de tuberculose s'atténue, le virage nucléaire revient à la normale assez rapidement. La granularité anormale des neutrophiles dure généralement plus longtemps que les autres modifications de l'hémogramme.

La teneur en éosinophiles dans le sang périphérique varie également en fonction de la phase du processus et de l'état allergique du corps. Leur nombre diminue jusqu'à l'anéosinophilie lors d'épidémies graves et prolongées et, inversement, augmente avec la résorption d'infiltrats et d'épanchements pleuraux, ainsi qu'avec les formes précoces de tuberculose primitive.

La plupart des formes de tuberculose primitive sont accompagnées d'une lymphopénie, parfois observée pendant plusieurs années, même après la cicatrisation de changements spécifiques. La tuberculose secondaire dans la phase aiguë, en fonction de la gravité du processus, peut être accompagnée d’un nombre normal de lymphocytes ou d’une lymphopénie.

Parmi les tests d’évaluation du processus tuberculeux, la détermination du taux de sédimentation érythrocytaire (ESR) joue un rôle important dans l’évaluation de l’évolution du processus tuberculeux et l’identification de ses formes actives. Une augmentation de la RSE indique la présence d'un processus pathologique (infection infectieuse-inflammatoire, purulente, septique, hémoblastose, maladie de Hodgkin, etc.) et sert d'indicateur de sa gravité, mais les indicateurs normaux de la RSE n'indiquent pas toujours l'absence de pathologie. La sédimentation des érythrocytes est accélérée par une augmentation de la teneur en globulines dans le sang, du fibrinogène, du cholestérol et par une diminution de la viscosité du sang. Le ralentissement de la sédimentation érythrocytaire est caractéristique des affections impliquant une hémoconcentration, une augmentation du contenu en albumine et en acides biliaires.

Hémogramme chez les patients atteints de tuberculose évolue au cours du traitement. Les changements hématologiques disparaissent plus vite, plus l'intervention thérapeutique est couronnée de succès. Cependant, il convient de garder à l’esprit les effets sur l’hématopoïèse de divers médicaments antibactériens. Ils provoquent souvent une éosinophilie, parfois une leucocytose, et plus souvent une leucopénie allant jusqu’à l’agranulocytose et à une réaction lymphoïde-réticulaire. Un contrôle hématologique systématique et l'analyse correcte des données obtenues sont essentiels pour évaluer l'état clinique du patient, la dynamique du processus et l'efficacité du traitement appliqué.

Analyse d'urine

Avec la tuberculose urinaire, le test d’urine est la principale méthode de diagnostic en laboratoire. Vous pouvez observer une leucocyturie, une érythrocyturie, une protéinurie, une hypoisosténurie, une mycobactérie tuberculeuse, une bactériurie non spécifique.

La leucocyturie est le symptôme le plus courant de la tuberculose de l'appareil urinaire avant une chimiothérapie spécifique et n'est absente que dans des cas exceptionnels, par exemple avec une oblitération complète de la lumière de l'uretère. Le test de Nechiporenko (détermination du nombre de leucocytes dans 1 ml d’urine) permet d’évaluer de manière plus objective le degré de leucocyturie dans la néphrotuberculose et, dans certains cas, de l’identifier dans une analyse d’urine normale. Cependant, il faut garder à l'esprit que la leucocytourie peut être une pyélonéphrite aiguë et chronique, une cystite, une urétrite, des calculs rénaux et des uretères.

Érythrocyturie. comme la leucocyturie. Il est considéré comme l'un des signes de laboratoire les plus fréquents de tuberculose de l'appareil génito-urinaire. La fréquence de l'hématurie dépend de la prévalence du processus, elle augmente avec le développement du processus tuberculeux destructeur dans les reins. L'érythrocyturie sans leucocyturie est plus caractéristique des premiers stades de la tuberculose rénale. L'hématurie, qui prévaut sur la leucocyturie, est un argument important en faveur de la tuberculose rénale dans sa différenciation avec la pyélonéphrite non spécifique.

Test sanguin biochimique

Dans la tuberculose, les modifications de certains paramètres biochimiques dépendent principalement de la phase du processus, des complications et de diverses maladies concomitantes. Chez les patients atteints de tuberculose inactive des poumons et d'autres organes, les protéines totales et les fractions protéiques du sérum sanguin ne sont pas modifiées et déterminent leur contenu normal.

Dans les formes aiguës de la maladie, ainsi que dans l’exacerbation et la progression des formes chroniques de tuberculose, le coefficient albumine-globuline diminue.

La détermination dans le sérum de la bilirubine directe et totale, de l'aspartate aminotransférase (ACT), de l'alanine aminotransférase (ALT), est essentielle pour évaluer l'état fonctionnel et les lésions organiques du foie résultant de la tuberculose et de ses complications. Détermination dynamique du niveau d'aminotransférases. La bilirubine dans le traitement des patients atteints de tuberculose, en particulier de ses formes sévères, est une composante obligatoire de l'examen biochimique des patients atteints de tuberculose et est réalisée mensuellement.

L'évaluation de l'état fonctionnel des reins comprend la détermination de la créatinine sérique et le calcul du taux de filtration glomérulaire à l'aide de la formule Cockroft-Gault. Le calcul du taux de filtration glomérulaire à l'aide du test de Reberg donne des résultats moins précis.

Le principal objectif des études biochimiques dynamiques chez les patients atteints de tuberculose est de contrôler le déroulement du processus, d'identifier en temps utile les effets secondaires des médicaments et de corriger de manière adéquate les troubles de l'homéostasie qui en résultent.

Utilisation de méthodes de recherche biochimiques pour la tuberculose extrapulmonaire

L’indicateur le plus informatif prend en compte la teneur en acide tuberculostéarique dans les fluides biologiques, mais sa définition pose de nombreuses difficultés techniques (nécessité d’utiliser la chromatographie en phase gazeuse et la spectrométrie de masse).

Il est prometteur de mesurer l'activité de l'adénosine désaminase, une enzyme détectée dans les fluides: synovial, péricardique, ascitique ou cérébro-spinal. Les principaux producteurs d'adénosine désaminase sont les lymphocytes et les monocytes. La détermination de l'activité de l'adénosine désaminase dans les liquides biologiques facilite le diagnostic de la synovite tuberculeuse, de la tuberculose des ganglions lymphatiques, de la méningite tuberculeuse, de la tuberculose séreuse.

Certains paramètres biochimiques en raison de leur non-spécificité ne sont déterminés que dans les fluides biologiques proches de la lésion. Le niveau des indicateurs est mesuré en réponse à l'administration sous-cutanée ou intracutanée de tuberculine (généralement avant l'administration et 48 et 72 heures après celle-ci). Ensuite, le degré d’augmentation du niveau du marqueur (en%) par rapport au niveau initial est calculé.

Détermination optimale dans l'urine de l'activité d'une enzyme transamidinase spécifique à un organe, dont l'apparition se caractérise par des lésions rénales de nature diverse. L’étude de la transaminidase n’est justifiée que dans les conditions d’administration sous-cutanée de tuberculine afin d’exacerber le processus inflammatoire local. L'activité de la transamidinase dans les urines est déterminée au début et 24 à 72 heures après l'administration de 50 TE de tuberculine. Une augmentation de la fermenturie de 2 fois et plus permet dans 82% des cas de différencier la tuberculose rénale active de l’exacerbation de la pyélonéphrite chronique.

Dans le cas de la tuberculose génitale féminine, les concentrations d'haptoglobine et de malondialdéhyde dans le sang sont déterminées par le test à la tuberculine provocateur. La tuberculine est administrée par voie sous-cutanée à une dose de 50 TE et, au bout de 72 heures, une étude biochimique répétée est réalisée. En cas d'étiologie tuberculeuse, le degré d'augmentation du taux d'haptoglobine est d'au moins 28% et le taux de malondialdéhyde est égal ou supérieur à 39%. Également utilisé pour déterminer l'activité de l'adénosine désaminase dans le liquide péritonéal dérivé de l'espace de Douglas. La ponctation est réexaminée 72 heures après l'administration intradermique de tuberculine à des doses de 0,1 et 0,01 TE dans la zone de projection des organes génitaux internes de la paroi abdominale antérieure. En faveur du processus tuberculeux, une augmentation de l'activité de l'adénosine désaminase de 10% ou plus par rapport au traitement initial est indicative.

En cas de lésion oculaire, on examine une réaction focale dans l’œil en réponse à une stimulation antigénique. En même temps, développement indésirable d’une réponse prononcée, accompagné d’une diminution des fonctions visuelles. L'évaluation des réactions focales minimales étant souvent difficile, pour objectiver la conclusion, il est recommandé de se concentrer parallèlement sur le degré d'augmentation de l'haptoglobine ou de l'adénosine désaminase sérique.

Toutes les études biochimiques doivent être effectuées en association avec d’autres méthodes.

Test de coagulation sanguine

La pertinence de l'étude de l'état du système de coagulation du sang en phthisiologie est due à la présence d'hémorragies ou d'hémorragies pulmonaires chez un certain nombre de patients atteints de tuberculose, ainsi que de complications hémocoagulantes dans le traitement chirurgical de la tuberculose. En outre, l'hémocoagulation intravasculaire latente, qui est naturellement concomitante de la tuberculose, affecte l'évolution de la maladie et l'efficacité de la chimiothérapie.

Chez les patients atteints de tuberculose pulmonaire avec une prédominance du composant exsudatif de l'inflammation, une diminution de l'activité anticoagulante du sang est observée. L'hémocoagulation intravasculaire n'est pas très prononcée chez les patients présentant une faible prévalence d'une lésion spécifique dans les poumons avec une prédominance du composant productif de l'inflammation. Chez les patients atteints de tuberculose pulmonaire avec hémoptysie et hémorragies pulmonaires, l'état du système de coagulation sanguine est différent: chez les patients présentant une faible perte de sang à la hauteur de l'hémoptère ou immédiatement après son arrêt, une forte augmentation de la coagulation sanguine est observée en raison d'une intensification marquée du processus de formation de thrombine tout en maintenant une contraction accrue. Chez les patients présentant une perte sanguine massive, une diminution du potentiel de coagulation est observée en raison d'une diminution de la concentration en fibrinogène. activité du facteur XIII, nombre de plaquettes. Au stade du traitement chirurgical chez les patients présentant des formes limitées de tuberculose pulmonaire, il n’ya pas de troubles significatifs avec le système d’homéostasie. Les patients présentant des processus communs lors de la pneumonomie ou de la pleuropneumonectomie développent souvent une CID, qui peut prendre la forme d'une «seconde maladie».

Pour surveiller l'état du système de coagulation sanguine chez les patients atteints de tuberculose pulmonaire, il est nécessaire de déterminer le temps de thromboplastine partielle activée (APTT), le fibrinogène, le temps de thrombine, l'indice de prothrombine, ainsi que le temps de saignement et le temps de coagulation du sang.

Études hormonales

Les observations expérimentales et cliniques modernes indiquent la présence de modifications du statut hormonal d'une pneumonie pulmonaire spécifique. Il est prouvé que la correction du dysfonctionnement des systèmes hypophyso-surrénalien, hypophysaire-thyroïdien et la fonction pancréatique en association avec un traitement antituberculeux contribuent à l'activation des processus de fibrogenèse et à la réparation dans le foyer d'une inflammation spécifique.

L’état fonctionnel du système hypophysaire-thyroïdien est déterminé par le contenu du sérum de triiodothyronine (T3), thyroxine (T4), l'hypophyse hypophysaire (TSH). Il a été établi que l’hypothyroïdie infraclinique est détectée chez 38 à 45% des patients atteints de tuberculose pulmonaire et elle est le plus souvent diagnostiquée dans les formes disséminée et fibreuse-caverneuse du processus. Sous ces mêmes formes, les niveaux tels que T sont considérablement réduits.3,si et t4, et il se produit un déséquilibre de ces hormones sous la forme d’une augmentation du rapport T4/ Ts.

La fonction du cortex surrénalien est évaluée par le taux de cortisol dans le sérum sanguin et la fonction endocrinienne du pancréas par la concentration d'insuline immuno-réactive. Dans la phase aiguë d'une maladie infectieuse, le besoin en cortisol et en insuline endogènes augmente. L'hyperinsulinémie indique également une résistance à l'insuline des tissus corporels, caractéristique de tout processus inflammatoire actif, en particulier spécifique. La détermination de la fonction glucocorticoïde des glandes surrénales atteintes de tuberculose pulmonaire active révèle la présence d'un hypercorticisme chez la majorité des patients. Les indicateurs normaux de la concentration sanguine de cortisol chez un patient présentant une inflammation infectieuse au cours de la période aiguë doivent être considérés comme une insuffisance relative de la fonction glucocorticoïde du cortex surrénalien, qui peut servir de base à un traitement substitutif par l'administration de doses adéquates de glucocorticoïdes.

Près du tiers des patients atteints de tuberculose pulmonaire peuvent être assurés que leur taux d'insulinminémie est assez faible et se rapproche de la limite inférieure de la norme, tandis que 13 à 20% présentent un hyperinsulinisme important. Les hypo et hyperinsulinismes relatifs sont tous deux des facteurs de risque élevés pour le développement de troubles du métabolisme des glucides de gravité variable. Ces changements dans l'activité fonctionnelle des cellules B pancréatiques nécessitent un contrôle glycémique régulier chez les patients atteints de tuberculose et une prévention rapide du diabète. En plus. Ceci constitue une justification supplémentaire pour l'utilisation de doses physiologiques d'insuline dans le traitement complexe de la tuberculose.

En général, la diminution du taux d'hormones thyroïdiennes, leur déséquilibre, l'hypercortisolémie et l'hyperinsulinisme sont plus prononcés chez les patients présentant un processus tuberculeux sévère, des lésions pulmonaires étendues et des symptômes graves d'intoxication tuberculeuse.

Diagnostic microbiologique de la tuberculose

Des études microbiologiques sont nécessaires pour identifier les patients atteints de tuberculose, vérifier le diagnostic, surveiller et corriger la chimiothérapie, évaluer les résultats du traitement, en d'autres termes, à partir du moment de l'enregistrement d'un patient atteint de la tuberculose jusqu'à son retrait du registre.

Tous les programmes et projets épidémiologiques reposent sur une estimation du nombre de bactéries excrétées qui ne peut être réalisée sans l'utilisation de méthodes de laboratoire pour la détection de Mycobacterium tuberculosis. Lorsque l'on examine la négociabilité de la population dite non organisée, le pourcentage d'excréments bactériens atteint 70 ou plus, ce qui fait des méthodes de laboratoire un moyen très efficace d'identifier les patients atteints de tuberculose dans ce groupe de population.

Méthodes microbiologiques traditionnelles pour le diagnostic de la tuberculose - études bactérioscopiques et culturelles. Les méthodes modernes considèrent la culture de Mycobacterium tuberculosis dans des systèmes automatisés, la PCR. Cependant, toutes ces méthodes sont nécessairement associées aux méthodes bactériologiques classiques.

Collection de matériel de diagnostic

L’efficacité des études de laboratoire dépend en grande partie de la qualité du matériel de diagnostic. Le respect des règles de collecte, de stockage et de transport du matériel de diagnostic et la mise en œuvre exacte de l'algorithme d'examen des patients ont une incidence directe sur le résultat et garantissent la sécurité biologique.

Pour la recherche sur la tuberculose en utilisant une variété de matériel. En raison du fait que la tuberculose pulmonaire est la forme la plus courante de lésions tuberculeuses, les sécrétions des arbres et autres types de sécrétions trachéobronchiques sont considérées comme le matériau principal de l'étude: écoulement des voies respiratoires supérieures obtenu après l'inhalation d'aérosol: eau de rinçage bronchique; lavages broncho-alvéolaires; matériel obtenu par bronchoscopie, biopsie transtrachéale et intrapulmonaire: aspiration des bronches, frottis laryngé, exsudats, frottis de plaies, etc.

L'efficacité de la recherche augmente si les patients effectuent une collecte contrôlée du matériel. Pour ce faire, allouez une salle spécialement équipée ou achetez des cabines spéciales. La collecte de matériel étant une procédure dangereuse, vous devez collecter du matériel de recherche en respectant les règles de sécurité infectieuses.

Le matériel de recherche sur Mycobacterium tuberculosis est recueilli dans des flacons stériles munis de bouchons bien vissés afin de prévenir la contamination de l'environnement et de protéger le matériel recueilli de la contamination.

Les flacons destinés à la collecte de matériel de diagnostic doivent répondre aux exigences suivantes:

  • doit être en matériau résistant aux chocs;
  • devrait fondre facilement pendant l'autoclavage;
  • être de volume suffisant (40-50 ml):
  • avoir une large ouverture pour la collecte des expectorations (diamètre d'au moins 30 mm);
  • être facile à utiliser, transparent ou translucide, de sorte que vous puissiez évaluer la quantité et la qualité de l'échantillon recueilli sans ouvrir le couvercle.

Pour obtenir des résultats de recherche optimaux, les conditions suivantes doivent être remplies:

  • la collecte du matériel est effectuée avant le début de la chimiothérapie;
  • le matériel nécessaire à l’étude doit être recueilli avant l’ingestion matinale de nourriture et de médicaments;
  • pour la recherche, il est souhaitable de recueillir au moins 3 échantillons d'expectorations du matin. Recueillir les expectorations pendant 3 jours consécutifs;
  • Le matériel collecté doit être livré au laboratoire dans les meilleurs délais:
  • dans le cas où il est impossible de livrer le matériel au laboratoire immédiatement, il est stocké dans un réfrigérateur à une température de l'air de 4 ° C pendant 48 heures au plus;
  • lors du transport du matériel, il est nécessaire de surveiller attentivement l'intégrité des flacons.

Les expectorations correctement collectées ont un caractère muqueux ou mucopurulent. Le volume optimal de la portion de crachat étudiée est de 3 à 5 ml.

Les mucosités sont collectées sous la supervision d'un professionnel de la santé. Personnes responsables de la collecte des expectorations, il est nécessaire de surveiller la mise en œuvre de certaines règles:

  • Il est nécessaire d'expliquer au patient le but de l'étude et la nécessité de ne pas tousser, ni la salive ni le mucus nasopharyngé, mais le contenu des voies respiratoires profondes. Ceci peut être réalisé à la suite d'une toux productive qui survient après quelques respirations profondes (2-3). Il est également nécessaire d'avertir le patient qu'il doit d'abord se rincer la bouche avec de l'eau bouillie pour éliminer la majeure partie de la microflore végétative de la cavité buccale et les débris alimentaires qui entravent l'étude des expectorations;
  • un travailleur médical participant à la collecte des expectorations, en plus d'une robe et d'un bonnet, doit porter un masque, des gants en caoutchouc et un tablier en caoutchouc;
  • debout derrière le patient, il est recommandé de garder le flacon le plus près possible des lèvres et de séparer immédiatement les crachats en toussant, tout en veillant à ce que le flux d'air soit dirigé loin du prestataire de soins de santé:
  • Une fois la collecte des expectorations terminée, le professionnel de la santé doit fermer soigneusement le flacon avec un capuchon et évaluer la quantité et la qualité des expectorations collectées. Ensuite, la bouteille est étiquetée et placée dans un bix spécial pour son transport au laboratoire.

Si le patient n'émet pas de crachats, un expectorant doit être administré la veille et tôt le matin le jour de la collecte du matériau: extrait de Altea medicinal (mukaltin), bromhexine, ambroxol, etc. - ou appliquer une inhalation irritante à l'aide d'un équipement installé dans la salle de collecte crachat Les matériaux ainsi collectés ne peuvent être conservés et doivent être examinés le jour de la collecte. Afin d'éviter son "rejet" dans le laboratoire dans la direction devrait faire une marque spéciale.

Si aucune recherche microbiologique n’est effectuée dans cette institution, le matériel de diagnostic collecté doit être livré de manière centralisée au laboratoire, sous réserve de la conservation obligatoire du matériel entre les livraisons au réfrigérateur ou avec l’utilisation de conservateurs. Livrez le matériel au laboratoire dans des boîtes d'expédition faciles à désinfecter. Chaque échantillon doit porter l'étiquette appropriée et l'ensemble du lot doit être rempli avec le formulaire d'accompagnement.

Modes et fréquence d'examen des patients

Lors du premier examen, dit diagnostic, de la tuberculose chez un patient, il est nécessaire d’enquêter sur au moins 3 portions de crachats dans les 2 ou 3 jours. collectées sous la surveillance du personnel médical, ce qui augmente l'efficacité de la microscopie.

Le dépistage primaire de la tuberculose doit être effectué par toutes les institutions de diagnostic médical du système de santé. Récemment, pour accroître l'efficacité de l'examen primaire, des "centres de microscopie" ont été organisés, dotés de laboratoires de diagnostic clinique, équipés de microscopes et d'équipements modernes pour garantir la sécurité des épidémies.

Dans les centres de traitement de la tuberculose, un programme de dépistage est utilisé, qui consiste en une étude de l'expectoration ou d'un autre matériel de diagnostic pendant au moins 3 fois en 3 jours. Au cours du traitement, des études microbiologiques sont effectuées régulièrement, au moins une fois par mois, dans la phase de chimiothérapie intensive. Au cours de la transition vers la phase de suivi, les études sont réalisées moins fréquemment - à des intervalles de 2 à 3 mois, tandis que la multiplicité de l’étude est réduite à deux.

Caractéristiques de la collecte de matériel de diagnostic dans la tuberculose extrapulmonaire

La particularité du matériel pathologique dans les formes de tuberculose extrapulmonaires est la faible concentration de Mycobacterium tuberculosis qui nécessite des méthodes de recherche microbiologique plus sensibles, tout d’abord des méthodes de plantation sur un milieu nutritif.

Dans la tuberculose urogénitale, l’urine est le matériel de recherche le plus accessible. L'échantillonnage d'urine doit être effectué par une infirmière qualifiée.

Les organes génitaux externes sont lavés à l'eau et au savon ou avec une solution faible de permanganate de potassium. Soigneusement traiter l'ouverture externe de l'urètre. Une portion moyenne d'urine matinale est recueillie dans un flacon stérile: chez l'homme - naturellement chez la femme - avec un cathéter. L'urine du pelvis rénal est collectée dans des tubes stériles pour le cathétérisme d'un ou deux reins, dans ce dernier cas - nécessairement séparément de chaque rein. Une petite quantité de cette urine est centrifugée, le précipité est examiné.

Chez l'homme, le sperme, les testicules, les sécrétions de la prostate sont centrifugés pour obtenir un sédiment. Lors de la localisation d’un processus spécifique dans la région génitale de l’homme, le massage de la prostate peut contribuer à la sécrétion de sécrétions contenant la tuberculose à Mycobacterium.

Le sang menstruel est prélevé sur les femmes par succion ou à l'aide d'un bonnet Kafka. Le matériau obtenu est débarrassé des globules rouges et lavé à l'eau distillée, puis centrifugé. Sédiment étudié.

Les écoulements du canal cervical de l'utérus sont recueillis dans n'importe quel récipient ou capuchon de Kafka, c'est-à-dire qu'il est souhaitable d'accumuler 1 à 2 ml de matériel pathologique.

Le matériel obtenu lors de la chirurgie des reins, des organes génitaux. biopsies, raclures de l'endomètre, homogénéisées. Pour ce faire, il est placé dans un mortier stérile et soigneusement broyé avec des ciseaux stériles. Du sable de rivière stérile est ajouté à la suspension résultante en une quantité égale à sa masse, puis 0,5-1,0 ml de solution de chlorure de sodium isotonique est broyé et le tout est broyé pour former une masse pâteuse additionnée d'une solution de chlorure de sodium isotonique (4-5 ml). Ensuite, on laisse la masse reposer pendant 1 à 1,5 minute et on examine le surnageant.

Tuberculose des os et des articulations. Ponctué (pus d'abcès), obtenu avec une seringue stérile, est placé dans un récipient stérile et immédiatement livré au laboratoire. Pipette stérile, préalablement humidifiée avec une solution stérile de chlorure de sodium isotonique, prélevez 2 à 5 ml de pus, transférez-la dans le flacon avec des billes et ajoutez 2 à 3 ml supplémentaires de solution de chlorure de sodium isotonique. La bouteille est fermée avec un bouchon et agitée dans l'appareil à blaguer pendant 8 à 10 minutes. La suspension homogénéisée est examinée.

Pour les formes fistuleuses de tuberculose ostéo-articulaire, le pus provient de la fistule. Les rejets abondants sont collectés directement dans le tube. En cas de faible écoulement de pus, la fistule est lavée avec une solution isotonique stérile de chlorure de sodium et les eaux de lavage recueillies dans un tube à essai ou un tampon imbibé de pus sont envoyées pour examen.

Le matériel chirurgical obtenu lors de la chirurgie des os et des articulations peut être constitué de masses purulentes nécrotiques, de granulations, de cicatrice, de tissu osseux, de tissu des membranes synoviales et d’autres substrats. Il est traité comme dans la tuberculose rénale.

L’examen microbiologique du liquide synovial dans une solution à 3% de citrate de sodium (rapport 1: 1) afin d’empêcher la coagulation est effectué directement après la ponction.

Tuberculose des ganglions lymphatiques. Le pus extrait lors de la ponction des ganglions lymphatiques est également examiné. sous forme de pus d'abcès intestinal. Les tissus des ganglions lymphatiques obtenus lors d'opérations chirurgicales, les biopsies, sont examinés comme dans d'autres formes de tuberculose.

L'étude des masses fécales de Mycobacterium tuberculosis est extrêmement rare en raison de l'absence presque complète de résultats positifs.

Microscopie des mycobactéries

La microscopie des expectorations est une méthode relativement rapide, simple et peu coûteuse qui devrait être utilisée dans tous les cas de suspicion de tuberculose. En outre, cette étude vise à évaluer l'efficacité de la chimiothérapie et à établir un rétablissement ou un résultat négatif du traitement en l'absence de résultats de culture.

Utilisez 2 méthodes d’examen microscopique:

  • méthode de microscopie directe, lorsqu'un frottis est préparé directement à partir d'un matériel de diagnostic;
  • Méthode de microscopie des sédiments préparés à partir de matériaux décontaminés pour la culture.

La première méthode est utilisée dans les laboratoires où seuls des examens microscopiques sont effectués (laboratoires de diagnostic clinique du réseau médical général).

Les meilleurs résultats de l'examen microscopique sont obtenus en concentrant le matériel de diagnostic (par exemple, par centrifugation).

Pour détecter Mycobacterium tuberculosis avec 50% de chances d’être examinée au microscope, 1 ml d’expectorations doit contenir plus de 5 000 cellules microbiennes. Les mucosités des patients atteints de formes pulmonaires de tuberculose contiennent généralement une quantité importante de bactéries résistantes aux acides, ce qui leur permet de les identifier en toute confiance pendant la bactérioscopie. La sensibilité diagnostique de cette méthode peut être améliorée en examinant plusieurs échantillons d'expectorations d'un patient. Une bactérioscopie négative n'exclut pas un diagnostic de tuberculose, car les expectorations de certains patients contiennent moins de mycobactéries que celles détectées par microscopie. Une mauvaise préparation des frottis d'expectoration peut également être à l'origine d'un examen bactérioscopique négatif.

La méthode la plus courante pour détecter des mycobactéries acido-résistantes dans un frottis est la coloration selon Ziehl-Nelsen. Le procédé repose sur la pénétration de la fuchsine carbolique dans la cellule microbienne à travers la membrane, qui comprend une couche de cire-lipide, avec des effets simultanés de chauffage et un puissant effet de gravure du phénol. La décoloration ultérieure du frottis avec une solution d'acide sulfurique à 25% ou d'alcool chlorhydrique à 3% entraîne la décoloration de toutes les structures non résistantes aux acides. Les éléments de frottis blanchis sont colorés avec une solution à 0,3% de bleu de méthylène. Les mycobactéries ne perçoivent pas les colorants aniline habituels, de sorte que les mycobactéries résistantes aux acides sont peintes en couleur rouge framboise et que les autres microbes et éléments cellulaires sont en bleu.

Pour examiner les frottis colorés au Zilu-Nelsen, on utilise un microscope binoculaire léger avec un objectif à immersion (grossissement 90 ou 100 fois) et un oculaire avec un grossissement 7 ou 10 fois. Examiner 100 champs de vision, ce qui est suffisant pour identifier dans le frottis des mycobactéries simples. Si le résultat d’une telle étude est négatif, il est recommandé d’afficher 200 autres champs de vision pour confirmation. Enregistrez les résultats en indiquant le nombre de mycobactéries résistantes aux acides (CUM) détectées.

En plus de cette technique, les fluorochromes sont utilisés pour la microscopie à fluorescence, ce qui permet d'obtenir les meilleurs résultats. L'utilisation de cette méthode augmente l'efficacité de la microscopie de 10-15%. Lors du traitement de colorants luminescents mycobacterium (auramine, rhodamine, etc.), ces substances sont également associées à des structures analogues à la cire de la cellule microbienne. Lorsqu'une cellule peinte est irradiée avec une source de lumière excitante (un certain spectre de rayons ultraviolets), elle commence à émettre une lumière orange ou rouge vif sur un fond noir ou vert foncé. En raison de la luminosité et du contraste élevés de l'image visible, il est possible de réduire le grossissement global du microscope de 4 à 10 fois, ce qui élargit le champ de vision et diminue le temps de visualisation de la préparation. Parallèlement à cela, en raison d'une profondeur de champ beaucoup plus grande, il est possible d'augmenter le confort de l'étude.

Lors de l'utilisation de la microscopie à fluorescence, la visualisation de la même zone d'un frottis prend beaucoup moins de temps que celle obtenue avec la microscopie optique des frottis colorés au moyen de Tsil-Nelsen. Si, au cours d'une journée de travail, un microscopiste examine environ 20 à 25 frottis de ce type, il peut alors examiner plus de 60 à 80 échantillons simultanément. Les microscopistes expérimentés savent que la teinture de cellules avec un mélange d'auramine et de rhodamine est spécifique aux mycobactéries résistantes aux acides, qui dans ce cas ont l'aspect de bâtonnets dorés. Les saprophytes sont de couleur verdâtre.

Un autre avantage important de la méthode de microscopie à fluorescence est la capacité de détecter des mycobactéries modifiées perdues sous l’influence d’un certain nombre de facteurs défavorables, notamment une chimiothérapie intensive, la propriété de résistance à l’acide et qui ne sont pas détectées à cet égard lorsqu’elles sont colorées au Tsil-Nelsen.

Les inconvénients de la microscopie à fluorescence incluent le coût relativement élevé du microscope et son fonctionnement. Cependant, dans les grands laboratoires centralisés ou autres, où la charge dépasse le taux de 3 techniciens travaillant avec trois microscopes conventionnels, il est moins coûteux d’utiliser un seul microscope à fluorescence.

Les méthodes bactérioscopiques ont une spécificité assez élevée (89-100%). Environ 97% des résultats positifs obtenus par n'importe quelle méthode de microscopie sont confirmés sans ambiguïté par les résultats de l'ensemencement.

Il convient de noter que l’examen microscopique d’un frottis de matériel pathologique ne permet pas de déterminer l’espèce de mycobactéries résistantes aux acides identifiée. La méthode de microscopie ne nous permet de conclure que sur la présence ou l'absence de microorganismes résistant aux acides dans la préparation, ce qui s'explique par l'existence dans la nature d'un grand nombre de microorganismes non tuberculeux résistant à l'acide de la tuberculose morphologiquement similaires aux mycobactéries.

Evaluation des résultats de la microscopie réalisée en unités semi-quantitatives.

Afin de pouvoir comparer les résultats de différentes méthodes de microscopie, des coefficients empiriques sont introduits. Par exemple, pour comparer les résultats d'un frottis coloré avec des colorants fluorescents avec des données de microscopie optique (grossissement 1000x), il est nécessaire de diviser le nombre de mycobactéries résistantes aux acides détectées par un microscope à fluorescence par le facteur correspondant à un grossissement de 250x du microscope par 10. 450 fois - à 4, avec 630 fois - à 2.

Caractéristiques de la microscopie dans la tuberculose extrapulmonaire

Une microscopie directe est réalisée, ainsi qu'une microscopie de frottis préparée après enrichissement, suivie d'une coloration de Zill-Nelsen ou de colorants luminescents. La microscopie à frottis direct est inefficace en raison de la faible concentration de mycobactéries dans le matériel. Il est donc plus rationnel d'utiliser des méthodes d'enrichissement. La centrifugation est la plus efficace. Si le matériel biologique est visqueux, une centrifugation est effectuée avec homogénéisation et liquéfaction simultanées du matériau, qui est réalisée à l'aide de centrifugeuses à grande vitesse avec une force centrifuge de 3 000 g et de solutions d'hypochlorite. D'autres méthodes d'enrichissement, telles que la microflotation, ne sont actuellement pas utilisées en raison de la formation d'aérosols biologiquement dangereux.

Méthode culturelle pour le diagnostic de la tuberculose

La méthode d'ensemencement, ou méthode de culture, est plus sensible que la microscopie à frottis et présente plusieurs avantages par rapport à cette dernière. Il permet de détecter plusieurs dizaines de mycobactéries viables dans le matériel étudié et présente une grande valeur diagnostique. Ceci est particulièrement important dans l’étude du matériel provenant de patients nouvellement diagnostiqués ou traités qui sécrètent une petite quantité de mycobactéries.

Par rapport à la microscopie, une étude de culture peut augmenter le nombre de patients tuberculeux identifiés de plus de 15-25% et également vérifier la tuberculose à des stades plus précoces, lorsque la maladie peut encore être traitée. Un avantage très important de la recherche culturelle est la possibilité d’obtenir une culture du pathogène, qui peut être identifiée et étudiée en relation avec la sensibilité aux médicaments, la virulence et d’autres propriétés biologiques.

Les inconvénients des méthodes de culture incluent leur durée (le temps d'attente pour les matériaux atteint 10 semaines). coût plus élevé, complexité de traitement du matériel de diagnostic.

Principes du traitement avant le semage du matériel de diagnostic

Les techniques microbiologiques conventionnelles ne peuvent pas être utilisées dans la recherche sur la tuberculose. C'est dû au fait. mycobacterium tuberculosis croît très lentement et la plupart des échantillons de matériel clinique contiennent des micro-organismes pyogènes et putréfiants à croissance rapide, des champignons. Leur croissance rapide sur un milieu nutritif riche entrave le développement des mycobactéries et ne permet pas d'isoler l'agent responsable de la tuberculose. Par conséquent, avant de semer, le matériel de diagnostic doit être prétraité. De plus, les mycobactéries libérées par les voies respiratoires du patient sont généralement entourées d’une grande quantité de mucus, ce qui rend difficile la concentration. À cet égard, avant de semer les expectorations et autres matériaux similaires, leur liquéfaction et leur décontamination sont nécessaires.

Tous les détergents et décontaminants ont un effet toxique plus ou moins prononcé sur les mycobactéries. À la suite du traitement, jusqu'à 90% des mycobactéries peuvent mourir. Afin de préserver une partie suffisante de la population mycobactérienne, il est nécessaire d'utiliser des méthodes de traitement douces permettant, d'une part, de supprimer les microorganismes pyogènes et putréfactifs à croissance rapide, et d'autre part, de préserver la viabilité des mycobactéries présentes dans le matériau.

En fonction du matériau, de son degré d'homogénéité et de sa contamination, différents décontaminants sont utilisés pour le traitement de présavage: pour l'expectoration - solution d'hydroxyde de sodium à 4%, solutions de phosphate de sodium à trois substituants à 10%, phosphate trisodique de chlorure de benzalkonium, NALC-NaOH (N-acétyl-L-cystéine). soude) avec une concentration finale en NaOH de 1%, pour l'urine et les autres matières liquides - une solution d'acide sulfurique à 3%, pour les échantillons contaminés, les matières contenant des matières grasses - une solution d'acide oxalique à 5% maximum. En outre, dans certains cas, utilisez des enzymes, des agents de surface (détergents). L'utilisation de l'interpolation et de certains autres détergents s'accompagne d'une diminution du nombre de cellules mycobactériennes mortes (40 à 50% survivent). Cependant, ils ne peuvent être utilisés que pour des matériaux liquides. Les plus répandus au monde ont reçu du NALC-NaOH. publié en ensembles. Cette méthode permet d’isoler plus de 85% de la population cellulaire mycobactérienne. La décontamination des matériaux solides contenant des tissus est plus difficile car il est difficile de deviner le degré de dispersion du matériau lors du processus d'homogénéisation. Par exemple, le traitement des échantillons de biopsie des ganglions lymphatiques s'accompagne souvent d'une fréquence accrue de contamination par une flore étrangère. Dans ce cas, 1% d'étonium peut être utilisé.

Le matériau non homogène est homogénéisé à l'aide de billes de verre en présence de décontaminants. Les matériaux liquides sont pré-centrifugés et seuls les sédiments sont traités.

Techniques de semis et d'incubation

Après le prétraitement, le matériau est centrifugé, ce qui entraîne la précipitation de mycobactéries et l'augmentation de son contenu dans les sédiments («enrichissement des sédiments»). Le précipité résultant est soumis à une neutralisation et ensemencé (inoculé) à la surface d'un milieu nutritif dense ou de tubes à essai avec un milieu liquide (semi-liquide). Des frottis sont préparés pour l'examen microscopique de la partie restante du sédiment. La technique d'ensemencement devrait empêcher la contamination croisée du matériel de diagnostic.

Pour une interprétation clinique fiable des résultats de la recherche microbiologique, il est nécessaire de respecter la règle suivante: les études microscopiques et culturelles doivent être effectuées en parallèle à partir du même échantillon de matériel de diagnostic.

Les tubes inoculés sont placés dans un thermostat à 37 ° C pendant 2 jours en position horizontale. Cela permet une absorption plus uniforme du matériau dans le milieu nutritif. Après 2 jours, les tubes sont transférés dans une position verticale et scellés hermétiquement avec des bouchons en caoutchouc ou en silicone pour empêcher le substrat ensemencé de se dessécher.

Cultures conservées dans un thermostat à 37 ° C pendant 10 à 12 semaines avec observation hebdomadaire régulière. Avec chaque vue de test, les paramètres suivants sont enregistrés:

  • terme observé visuellement à partir de la date de croissance des semailles;
  • taux de croissance (nombre d'UFC);
  • contamination de la plantation par une flore microbienne étrangère ou des champignons (ces tubes sont retirés);
  • pas de croissance visible. Les tubes sont laissés dans le thermostat jusqu'au prochain visionnage.

Milieu nutritif

Pour la culture de mycobactéries en utilisant différents milieux nutritifs; dense, semi-liquide, liquide. Cependant, aucun des milieux nutritifs connus n’a les propriétés qui assurent la croissance de toutes les cellules mycobactériennes. À cet égard, pour améliorer les performances, il est recommandé d'utiliser simultanément 2 ou 3 milieux nutritifs de composition différente.

L'OMS recommande le milieu de Lowenstein-Jensen comme milieu de référence pour l'isolement primaire de l'agent responsable de la tuberculose et pour la détermination de sa sensibilité au médicament. Il s’agit d’un milieu dense pour les œufs sur lequel la croissance des mycobactéries est obtenue 20 à 25 jours après l’ensemencement de matériel bactérioscopiquement positif. Les cultures de matériel bactérioscopiquement négatif nécessitent une période d'incubation plus longue (jusqu'à 10-12 semaines).

Dans notre pays, la distribution proposée par E.R. Finn Egg Medium Finn II. Il diffère en ce que, au lieu de la L-asparagine, il utilise du glutamate monosodique, ce qui déclenche d'autres voies de synthèse des acides aminés des mycobactéries. La croissance apparaît sur ce support un peu plus tôt et la fréquence de la sécrétion de mycobactéries est 6 à 8% plus élevée que sur le support de Levenshtein-Jensen.

Pour améliorer l'efficacité du diagnostic bactériologique de la tuberculose extrapulmonaire, il est conseillé d'inclure un milieu modifié par Finn-II dans le complexe de milieux nutritifs. Pour accélérer la croissance, du thioglycolate de sodium (0,05%) est ajouté au milieu nutritif Finn-II, ce qui réduit la concentration en oxygène. Pour protéger les systèmes enzymatiques mycobactériens des produits toxiques de la peroxydation lipidique, l’antioxydant acétate d’a-tocophérol est introduit dans le milieu nutritif Finn-II à une concentration de 0,001 µg / ml. Semer le matériel de diagnostic produit par la méthode standard.

Dans les laboratoires russes pour la tuberculose, d’autres modifications des milieux nutritifs solides sont également utilisées; proposé par G.G. Milieu nutritif mordovien "New", développé par V.A. Anikin milieu nutritif A-6 et A-9, etc.

En raison du fait qu'au cours de la chimiothérapie, divers systèmes métaboliques de la cellule microbienne sont endommagés, une partie de la population mycobactérienne perd sa capacité à se développer normalement sur un milieu nutritif ordinaire et nécessite un milieu nutritif osmotiquement équilibré (semi-liquide ou liquide).

Évaluation et enregistrement des résultats du matériel de diagnostic de semis

Certaines souches et certains types de mycobactéries se développent lentement, une croissance peut apparaître même au 90ème jour. Le nombre de ces cultures est faible, mais cela leur permet de résister aux cultures dans un thermostat pendant 2,5 à 3 mois.

Les cultures virulentes de Mycobacterium tuberculosis se développent généralement sur des milieux d'œufs denses sous la forme de colonies en forme de R de différentes tailles et espèces. Les colonies sont sèches, ridées, ivoire, légèrement pigmentées. Dans d'autres environnements, les colonies de Mycobacterium tuberculosis peuvent être plus humides. Après une chimiothérapie ou au cours du traitement, des colonies lisses à croissance humide (formes S) peuvent être libérées.

Lors de l'isolement des cultures, une série d'études spéciales est utilisée pour distinguer Mycobacterium tuberculosis des mycobactéries non tuberculeuses et des saprophytes résistant aux acides.

Une réponse positive est donnée après un examen microscopique obligatoire d'un frottis coloré au Zil-Nelsen provenant de colonies cultivées. Dans le cas de la croissance de mycobactéries dans des frottis, on trouve des bâtonnets rouge vif, couchés seuls ou en groupes, formant des grappes sous forme de feutre ou de tresses. Dans les cultures jeunes, en particulier celles isolées de patients traités par chimiothérapie pendant longtemps, les mycobactéries se caractérisent par un polymorphisme prononcé, allant jusqu'à la présence de variants courts, presque coccoïdes ou allongés, similaires au mycélium fongique, ainsi que de formes en bâtonnets.

Le taux de croissance des mycobactéries est indiqué par le schéma suivant: (+) - 1-20 UFC dans un tube à essai (excrétion bactérienne maigre); (++) - 20-100 UFC in vitro (excrétion bactérienne modérée); (+++) -> 100 UFC in vitro (excrétion abondante de bactéries). En diagnostic de tuberculose en laboratoire, il ne suffit pas de donner une réponse, que mycobactérie soit détectée ou non par telle ou telle méthode. avoir une compréhension détaillée du volume et de la nature de la population mycobactérienne, de sa composition et de ses propriétés. Ce sont ces données qui permettent d’interpréter correctement l’état du processus, de planifier les tactiques et de corriger rapidement le traitement.

Au cours des dernières années, pour accélérer la croissance des mycobactéries, des milieux nutritifs à base d'agar-agar avec divers suppléments de croissance et l'utilisation d'un mélange gazeux spécial ont été proposés. Pour obtenir la croissance de mycobactéries sur ces environnements pendant la culture, créez une atmosphère avec une teneur élevée en dioxyde de carbone (4-7%). Pour ce faire, utilisez spécial WITH2-incubateurs. Cependant, les systèmes automatisés les plus développés pour la culture de mycobactéries: MGIT-BACTEC-960 et MB / Bact.

L'un de ces systèmes est le système MGIT (tube indicateur de croissance de mycobactéries), qui fait partie du développement des technologies de pointe et est conçu pour accélérer le diagnostic bactériologique de la tuberculose et déterminer la sensibilité des mycobactéries aux médicaments de première intention et à certains médicaments de deuxième intention. MGIT se concentre sur son utilisation dans le dispositif VASTES-960. Les microorganismes sont cultivés dans des tubes spéciaux avec un milieu nutritif liquide sur la base du milieu modifié Middlebrook-7H9. Pour stimuler la croissance des mycobactéries et inhiber la croissance de la microflore étrangère, on utilise des suppléments de croissance MGIT Growth Supplement et un mélange de médicaments antibactériens PANTA.

L'enregistrement de la croissance des microorganismes est effectué de manière optique. Il est basé sur la fluorescence résultant de la consommation d'oxygène par les mycobactéries en cours de croissance. Un colorant fluorochrome dépendant de l'oxygène est contenu au fond d'un tube à essai spécial et est recouvert d'une couche de silicone. La reproduction de mycobactéries entraîne une diminution de la quantité d'oxygène dans le tube et une diminution de sa concentration, ce qui entraîne une augmentation de la fluorescence, qui devient visible lorsque le tube est irradié avec une lumière ultraviolette et est automatiquement détecté par des capteurs photoélectriques intégrés au dispositif VASTES-960. L'intensité de la lueur enregistrée en unités de croissance (unités de croissance GU). Les données de croissance sont entrées dans un ordinateur où elles peuvent être sauvegardées automatiquement. L'analyse informatique des courbes de croissance peut fournir des informations sur la présence de divers pools de mycobactéries, y compris non tuberculeuses, et permet également d'évaluer les propriétés de croissance des mycobactéries.

Du fait de l’introduction de tels systèmes, le temps d’apparition de la croissance des mycobactéries a été considérablement réduit: 11 jours en moyenne sur WASTES-960 et 19 jours sur MB / Bact contre 33 jours sur un milieu nutritif dense standard. Il est à noter que ces systèmes nécessitent un personnel hautement qualifié. Le matériel de semis sur un support liquide doit être accompagné d'un semis sur un support Levenshteyn-Jensen, qui joue le rôle d'intermédiaire dans les cas où la tuberculose ne provoque pas de croissance sur un autre support.

Détermination de la sensibilité aux médicaments des mycobactéries

Déterminer le spectre et le degré de sensibilité des mycobactéries aux médicaments antituberculeux revêt une importance clinique, ainsi que pour l'évaluation épidémiologique de la propagation de la tuberculose pharmacorésistante. En outre, le suivi de la pharmacorésistance permet d’évaluer l’efficacité du programme antituberculeux dans son ensemble, en tant qu’indicateur intégral du travail de toutes les composantes des activités antituberculeuses.

La multiplicité et le moment de la sensibilité aux médicaments:

  • avant le début du traitement une fois pour déterminer la stratégie et la tactique de traitement:
  • lors de l'isolement des cultures de patients à partir de divers matériaux (expectorations, BAL, urine, exsudats, liquide céphalo-rachidien, etc.), toutes les souches isolées sont examinées:
  • à la fin de la phase intensive du traitement en l'absence de dynamique clinique et radiologique:
  • si nécessaire, modifiez le schéma thérapeutique dans les cas suivants:
    • manque de négativité des expectorations;
    • re-culture après négativité des expectorations;
    • une forte augmentation du nombre de KUM dans un frottis après la diminution initiale. Il est bien connu que des souches de Mycobacterium tuberculosis hétérogènes en termes de sensibilité aux médicaments sont isolées du matériel provenant d'un patient atteint de tuberculose. La sensibilité des souches aux médicaments antituberculeux peut varier en fonction de la gamme de médicaments, du degré, de la fréquence et du taux de résistance.

Le degré de résistance aux médicaments de Mycobacterium tuberculosis est déterminé conformément à des critères établis, qui sont centrés sur la signification clinique de la résistance et dépendent de l'activité antituberculeuse du médicament, de sa pharmacocinétique et de sa concentration dans la lésion. dose thérapeutique maximale et ainsi de suite.

La détermination de la sensibilité aux médicaments des mycobactéries est actuellement effectuée par des méthodes microbiologiques:

  • concentrations absolues (méthode de dilution sur des milieux nutritifs solides ou liquides),
  • les proportions
  • coefficient de résistance.

La résistance se manifeste généralement sous la forme de croissance observée visuellement de colonies de Mycobacterium tuberculosis. Cependant, il existe des techniques qui induisent une croissance aux stades précoces de la division des cellules de Mycobacterium sous forme de réactions colorées. Ces méthodes réduisent la durée du test de 3-4 à 2 semaines.

La méthode des concentrations absolues recommandée par le Comité de chimiothérapie de l'OMS, qui est la méthode la plus simple sur le plan méthodologique, mais exige une normalisation élevée et une précision des procédures de laboratoire, s'est généralisée en Russie. Le test de sensibilité aux médicaments consiste en un ensemble de tubes contenant un milieu nutritif modifié avec des médicaments antituberculeux. Le kit comprend 2 ou 3 tubes contenant chacune des concentrations de chacun des médicaments utilisés, un tube témoin avec un milieu sans médicament et un tube contenant 1 000 μg / ml de salicylate de sodium ou 500 μg / ml d’acide para-nitrobenzoïque pour détecter la croissance de mycobactéries non tuberculeuses.

Pour la préparation d'un ensemble de milieux avec des médicaments utilisant un milieu modifié Lowenstein-Jensen (sans amidon), qui est versé dans des flacons. Dans chaque flacon, ajoutez une certaine quantité de la dilution appropriée du médicament antituberculeux. Le contenu des flacons est soigneusement mélangé, versé dans des éprouvettes et roulé dans une position inclinée pendant 40 minutes à une température de 85 ° C. Il est recommandé de coaguler le milieu dans un tournevis électrique avec contrôle automatique de la température. Médicament avec médicaments antituberculeux

La 1ère rangée peut être conservée au réfrigérateur à 2-4 ° C pendant 1 mois, avec les médicaments de la 2ème rangée - pas plus de 2 semaines. Les supports de stockage contenant des médicaments à la température ambiante sont inacceptables. Lors de la préparation de solutions de médicaments antituberculeux, leur activité est prise en compte, en calculant la concentration, ajustée en fonction du poids moléculaire de la partie non spécifique du médicament, de la pureté, etc. Déterminer la sensibilité au médicament en utilisant uniquement des substances chimiquement pures.

Le principe de la méthode consiste à déterminer la concentration du médicament antituberculeux, ce qui inhibe la croissance d’une partie importante de la population mycobactérienne. Lorsqu'elle est correctement effectuée, cette méthode a une bonne précision.

Avant de tester, il est nécessaire de s’assurer que la culture sélectionnée de Mycobacterium tuberculosis ne présente pas de microflore étrangère. À partir d'une culture de mycobactéries dans une solution à 0,9% de chlorure de sodium, une suspension homogène contenant 500 millions de cellules microbiennes dans 1 ml (standard de turbidité optique de 5 unités) est préparée. La suspension résultante est diluée avec une solution de chlorure de sodium à 0,9% (1:10) et 0,2 ml de suspension est ajouté à chaque tube d'un ensemble de milieux de culture. Les tubes ensemencés sont placés dans un thermostat à 37 ° C et maintenus en position horizontale pendant 2-3 jours afin que la surface biseautée du milieu nutritif soit uniformément inoculée avec une suspension de Mycobacterium tuberculosis. Ensuite, les tubes sont transférés en position verticale et incubés pendant 3-4 semaines. La mesure des résultats est réalisée en 3-4 semaines.

Étant donné que le moment de l'isolement d'un agent pathogène du matériel clinique sur un milieu nutritif est d'au moins 1 à 1,5 mois, les résultats de la détermination de la sensibilité au médicament par cette méthode ne peuvent être obtenus pas plus tôt que 2 à 2,5 mois après l'ensemencement du matériel. C'est l'un des principaux inconvénients de la méthode.

Interpréter les résultats de la détermination de la sensibilité aux médicaments des mycobactéries en fonction de certains critères. Sur milieu dense, une culture est considérée comme sensible à la concentration du médicament contenue dans le milieu si le nombre de colonies de mycobactéries cultivées dans ce tube avec le médicament ne dépasse pas 20 avec une croissance abondante sur le tube témoin sans médicament. Seulement en présence de plus de 20 colonies, la culture est considérée comme résistante à cette concentration. En pratique, lors de la réception des résultats de croissance dans les éprouvettes, près de 20 UFC. il est nécessaire d'avertir l'unité clinique que la sensibilité ou la stabilité dans ce cas est de nature limite, car cela peut parfois expliquer la dynamique floue des indicateurs cliniques.

Pour divers médicaments, une certaine concentration a été établie, à laquelle on observe la multiplication de la population mycobactérienne critique. Ces concentrations sont appelées "critiques". En tant que critère de stabilité, l’ampleur de la croissance de la population mycobactérienne sur le milieu nutritif avec le médicament à une concentration critique est utilisée.

En phytothérapie nationale, la détermination de la résistance aux médicaments ne se limite pas à la détermination des concentrations critiques. C'est dû au fait. que la détermination étendue du niveau de résistance aux médicaments de l'agent pathogène permet au clinicien de formuler plus correctement des tactiques de chimiothérapie en utilisant la connaissance relative à l'effet de potentialisation des combinaisons de médicaments, d'anticiper la résistance croisée ou d'appliquer des médicaments plus efficaces du groupe des médicaments antituberculeux utilisés.

La méthode des concentrations absolues est toutefois la plus simple et la plus sensible aux erreurs de mise en œuvre. Plus fiable, en particulier pour déterminer la sensibilité aux médicaments de deuxième intention, et la méthode des proportions est courante en dehors de la Russie. Il prend en compte les inconvénients de la méthode de la concentration absolue, mais prend plus de temps à effectuer.

La méthode est très similaire à la méthode de la concentration absolue. Préparation des éprouvettes avec des médicaments fabriqués de la même manière. comme avec la méthode de la concentration absolue. Cependant, la dose d'ensemencement d'une suspension de Mycobacterium tuberculosis est réduite de 10 fois. qui limite la fréquence de la résistance spontanée de certaines souches de Mycobacterium tuberculosis à des médicaments tels que l’éthambutol, le protionamide, la capréomycine. En tant que contrôle, utilisez 2 ou 3 tubes avec une dose de semence égale aux tubes à essai, dilués en série 10 et 100 fois. Le critère de résistance est la proportion de croissance observée visuellement de Mycobacterium tuberculosis. Pour les médicaments de la 1re rangée, le critère de durabilité est l'excès de croissance de 1% de la population initiale, pour les médicaments de la 2e rangée - croissance de 1 ou plus de 10% de la valeur initiale, en fonction de la concentration critique sélectionnée.

En 1997, le groupe de travail de l'OMS et de l'Union internationale de lutte contre la tuberculose pour la détection de la résistance aux antituberculeux a modifié ces critères, suggérant que les mycobactéries se développant sur le milieu d'œuf dense de Levenshteyn-Jensen soient considérées comme stables aux concentrations suivantes:

  • dihydrostreptomycine - 4 µg / ml;
  • isoniazide - 0,2 µg / ml:
  • rifampicine - 40 µg / ml:
  • Ethambutol - 2 µg / ml.

En 2001, des concentrations critiques ont été proposées pour les médicaments de deuxième intention suivants (pour une proportion critique de 1%):

  • capréomycine - 40 µg / ml;
  • protionamide - 40 µg / ml;
  • kanamycine - 30 µg / ml;
  • viomycine - 30 µg / ml;
  • cyclosérine - 40 µg / ml;
  • acide aminosalicylique - 0,5 µg / ml;
  • Ofloxacine - 2 µg / ml.

Les résultats de croissance sont évalués après 4 semaines au stade préliminaire et après 6 semaines de culture en tant que culture finale.

Pour déterminer la sensibilité des médicaments au pyrazinamide, largement utilisé dans la chimiothérapie moderne de la tuberculose, la concentration critique recommandée est de 200 µg / ml. Cependant, il n’existe toujours pas de méthode généralement acceptée pour déterminer la résistance du médicament à ce médicament sur un milieu nutritif solide, car son activité antibactérienne ne se manifeste que dans un milieu acide (pH o C;

  • absence de formation de pigment (couleur ivoire);
  • couleur prononcée résistante à l'acide;
  • pâte de niacine positive;
  • test positif à la nitrate réductase;
  • l'absence de catalase thermostable (68 o C).
  • le manque de croissance sur l'environnement de Levenshteyn-Jensen, contenant:
    • 1000 µg / ml de salicylate de sodium,
    • 500 µg / ml d'acide paranitrobenzoïque,
    • 5% de chlorure de sodium:
  • croissance en présence d'acide thiophène-2-carboxylique 1-5 µg / ml.
  • La pertinence de la différenciation des mycobactéries isolées augmentera considérablement avec l’augmentation de la fréquence d’enregistrement des cas de VIH / sida associés à la tuberculose ou à la mycobactériose. Actuellement, il n’existe pas de certitude absolue que les laboratoires régionaux pratiques soient prêts à effectuer cette quantité de travail correctement.

    Diagnostic immunologique de la tuberculose

    Un certain nombre de phénomènes universels, de médicaments et de tests immunologiques ont été découverts au cours de la tuberculose ou sur le modèle de la réponse immunitaire aux mycobactéries. Celles-ci incluent le BCG et la tuberculine, un phénomène tel que le THS cutané (tests tuberculiniques - réactions de Pirke et Mantoux), la réaction à l'administration sous-cutanée de tuberculine à des animaux sensibilisés (phénomène de Koch). Certains des premiers anticorps dans une maladie infectieuse ont également été trouvés dans la tuberculose. Bien entendu, plus les mécanismes de l'immunité antituberculeuse et leur contrôle génétique sont mieux compris, plus les méthodes immunologiques et les médicaments qui affectent le système immunitaire peuvent être plus largement utilisés pour résoudre des problèmes pratiques de phthisiologie.

    Le problème pratique le plus important et le plus difficile est actuellement considéré comme la détection de la tuberculose dans le processus de dépistage de masse de la population. Cependant, malgré de nombreux rapports de "succès" (sur un matériel limité), il n’existe aucune méthode immunologique appropriée (reproduite entre "toutes mains") et une préparation à ces fins.

    Les méthodes immunologiques, en particulier les études sérologiques (détermination des antigènes, anticorps) et les tests de provocation à la tuberculine, sont largement utilisés en pratique clinique.

    Parmi les études immunologiques utilisées dans le diagnostic différentiel, on trouve en premier lieu les méthodes sérologiques - la définition des antigènes et des anticorps dans différents milieux du corps.

    La spécificité de la détermination des anticorps dirigés contre Mycobacterium tuberculosis dépend des antigènes utilisés dans l'analyse immunitaire. Une quantité importante d’antigènes a été proposée, dont la première est la tuberculine PPD:

    • PPD et autres préparations complexes issues du fluide de culture;
    • désintégration par ultrasons;
    • Extrait de triton et autres préparations complexes de parois cellulaires;
    • 5 antigène (Daniel);
    • 60 antigène (Coccito);
    • lipoarabinomannane;
    • facteur de cordon (tréhalose-6,6-di-micolate);
    • phénoliques et autres glycolipides;
    • les lipopolysaccharides;
    • antigène de liaison à la fibronectine;
    • protéines (le plus souvent recombinantes); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA et autres.

    Après de nombreuses années de recherche par des scientifiques russes et étrangers, les principaux schémas de production d’anticorps et l’efficacité du diagnostic sérologique de la tuberculose ont été révélés: plus l’antigène est complexe, plus la sensibilité et les tests sont spécifiques. La spécificité dans les différents pays varie en fonction de l'infection de la population de M. tuberculosis et des mycobactéries non tuberculeuses, de la vaccination du BCG, etc. Chez les enfants, l'informativité du sérodiagnostic est inférieure à celle des adultes. Dans la tuberculose primitive (souvent des enfants), la définition des IgM est plus informative. avec secondaire - IgG. Dans les informations sérodiagnostiques infectées par le VIH, la détermination des anticorps diminue. L'efficacité de la détermination des anticorps dépend d'un certain nombre de «moments cliniques»: l'activité du processus (la présence ou l'absence d'un «isolement» de mycobactéries, la présence de cavités, le degré d'infiltration), l'ampleur du processus, la durée de son évolution.

    La sensibilité de la méthode immunoenzymatique (ELISA) est d’environ 70%. Le manque d'efficacité de l'étude est dû à sa faible spécificité. Auparavant, la possibilité d'utiliser le dépistage sérologique dans les groupes à haut risque, en particulier chez les personnes présentant des modifications pulmonaires post-tuberculeuses, était envisagée.

    Pour augmenter la spécificité de l'ELISA, la recherche d'antigènes plus spécifiques, y compris ceux obtenus par génie génétique, se poursuit: ESAT-6 et d'autres (voir ci-dessus). L'utilisation d'antigènes strictement spécifiques (38 kDa, ESAT) augmente la spécificité. mais réduit considérablement la sensibilité de l'analyse. Outre les tests ELISA (systèmes de tests de laboratoire expérimentaux, par exemple, le kit Pathozyme ELISA), des kits d'immunochromatographie avec filtration latérale (Mycodot), ainsi que d'autres tests similaires (analyse par points sur la membrane) avec évaluation visuelle des résultats de l'étude, ont été proposés. Lors de la réalisation de ces tests, l’analyse a lieu dans un délai de 10 à 30 minutes; ils ne nécessitent pas d'équipement spécial, nécessitent une évaluation visuelle des résultats, associée à une subjectivité connue. Ces méthodes présentent approximativement les mêmes caractéristiques de sensibilité et de spécificité (70% et 90-93%, respectivement) que les méthodes ELISA traditionnelles.

    L'utilisation de méthodes d'analyse immunitaire a une certaine valeur supplémentaire, qui est prise en compte dans la complexité des méthodes utilisées, dans le diagnostic différentiel de la tuberculose, en particulier dans le diagnostic de ses formes extrapulmonaires. Le test ELISA est le plus efficace pour diagnostiquer la méningite tuberculeuse dans l’étude du liquide céphalorachidien. Dans ce cas, la sensibilité de l'analyse est comprise entre 80 et 85% et la spécificité entre 97 et 98%. Il existe des preuves de l'efficacité du dosage des anticorps anti-Mycobacterium tuberculosis dans le liquide lacrymal dans le diagnostic de l'uvéite tuberculeuse.

    Induction de la synthèse d'interféron gamma in vitro

    Le gamma-interféron (IFN-γ) est un facteur de défense immunitaire spécifique résultant de l'activation de systèmes enzymatiques macrophages. L'induction de la synthèse d'IFN-γ par les lymphocytes T sensibilisés provoque leur interaction avec les antigènes mycobactériens.

    Comme antigènes sont utilisés comme tuberculine PPD. et des antigènes spécifiques obtenus par génie génétique, en particulier les antigènes ESAT-6 (antigène sécrété tôt avec une masse moléculaire de 6 kDa) et CFP-10 (filtrat de culture protéique, 10 kDa). Le génie génétique ou les antigènes recombinants sont absents dans les cellules du vaccin BCG et des autres mycobactéries. Lors de l'utilisation de la tuberculine, les résultats du test d'induction IFN-γ sont comparables à ceux du test cutané à la tuberculine (corrélation directe). Lors de l'utilisation d'antigènes génétiquement modifiés, les résultats des tests sont plus spécifiques et ne dépendent pas d'une vaccination antérieure par le BCG. Lors de l'examen de sujets vaccinés n'ayant pas eu de contact avec une infection tuberculeuse, la spécificité du test est de 99%. La sensibilité du test chez les patients tuberculeux varie de 81 à 89%.

    Des tests et des tests basés sur la culture à court terme de cellules de sang total ou de cellules mononucléées isolées du sang avec des antigènes in vitro de Mycobacterium tuberculosis avec détermination ultérieure de la concentration en IFN-γ ou calcul du nombre de lymphocytes T synthétisant l'IFN-γ ont été développés. La concentration d'interféron synthétisée in vitro, déterminée par ELISA en utilisant des anticorps monoclonaux qui se lient à l'IFN-γ. Ensuite, en utilisant un étalon d’étalonnage IFN-γ, déterminez sa concentration dans l’éprouvette ou les puits de la tablette.

    Lors du test Elispot, nombre de lymphocytes T synthétisant l’IFN-γ. compté sur la surface de la coupe, couvert d'anticorps anti-IFN-γ.

    Les développeurs du diagnostic basé sur l'induction d'IFN-γ in vitro, qui a été approuvé par la US Drug and Product Agency, affirment qu'il est impossible de différencier l'infection tuberculeuse latente de la tuberculose active. Par conséquent, dans les régions présentant un niveau élevé d’infection, le test n’a aucune valeur diagnostique directe. Cependant, dans notre pays, il peut être utilisé pour différencier les infections à tuberculose chez les enfants des allergies après la vaccination, ainsi que pour évaluer le niveau d'immunité spécifique dans le processus de traitement.

    Actuellement, le système de test domestique permettant de déterminer l'induction de la synthèse de l'IFN-γ par des antigènes spécifiques de la tuberculose in vitro est en cours d'étude.

    Statut immunitaire et évolution de la tuberculose, immunocorrection

    Dans le processus de traitement de la tuberculose chez l’homme, il existe des modifications de l’antigénémie et de l’état du système immunitaire.

    Les données sur les modifications des exsudats et des tissus sont largement contradictoires. La seule chose que l’on puisse noter avec raison est qu’un grand nombre de lymphocytes T activés se trouvent généralement dans les granulomes tuberculeux.

    Il est logique de s'attarder sur deux autres points nécessaires pour comprendre le rôle des mécanismes immunologiques dans le traitement de la tuberculose chez l'homme:

    • Les patients atteints du sida ont une incidence particulièrement élevée de multirésistance aux médicaments;
    • en cas de multirésistance aux médicaments (et en l'absence d'infection par le VIH), une déficience de l'immunité (principalement la liaison des cellules T) est particulièrement significative.

    Dans la tuberculose, diverses méthodes d'immunocorrection sont largement utilisées: il s'agit principalement de médicaments agissant principalement sur l'immunité des lymphocytes T et le système des phagocytes mononucléés (hormones du thymus, isofon, licopide, polyoxidonium, etc.). ainsi que les mycobactéries entières (atténuées) et leurs composants.

    Diagnostic Biologique Moléculaire de la Tuberculose

    Les méthodes de biologie moléculaire dans le diagnostic des maladies infectieuses incluent principalement des méthodes basées sur la manipulation d'agents pathogènes bactériens et viraux avec du matériel génomique afin d'identifier un matériel génétique spécifique - des segments d'ADN avec une séquence nucléotidique spécifique de cette espèce ou des souches d'agents pathogènes, afin d'analyser des gènes spécifiques. Séquences d'ADN dans les gènes qui déterminent la sensibilité de l'agent pathogène à certaines substances médicinales, ainsi que pour analyser la fonction activité du lin de certains gènes de l'agent pathogène. Les méthodes biologiques moléculaires sont largement utilisées dans la recherche scientifique et les applications pratiques dans le diagnostic et le contrôle de diverses infections bactériennes et virales après la découverte en 1985 de Kerry Mulllis (lauréat du prix Nobel 1989) de la réaction en chaîne de la polymérase.

    Principes et possibilités de la méthode de réaction en chaîne de la polymérase

    La PCR permet d’amplifier (multiplier) in vitro la séquence nucléotidique (fragment d’ADN de l’agent pathogène) pendant plusieurs heures un million de fois. La conduite de la réaction en présence de brins simples d'ADN détermine la sensibilité extrêmement élevée de l'analyse.

    La séquence nucléotidique de certaines sections de la chaîne d'ADN détermine l'identité génétique du microorganisme, ce qui explique la grande spécificité de la PCR.

    L'intérêt de cette méthode pour la détection et l'étude des caractéristiques de Mycobacterium tuberculosis est dû aux caractéristiques biologiques du microorganisme à croissance très lente: le temps de doublement de l'ADN de Mycobacterium tuberculosis lors de sa culture est de 12 à 24 h.

    Le principe de la méthode PCR est l’amplification: plusieurs fois, des millions de fois. multiplication de sections d'une séquence d'ADN spécifique dans un microvolume de tube à essai avec répétition cyclique des trois étapes suivantes de la réaction, chacune d'entre elles ayant lieu dans un régime de température différent:

    • Stade I - la dénaturation de l'ADN double brin lorsqu'il est chauffé avec la divergence de ses chaînes;
    • Étape II - liaison complémentaire (hybridation) d'amorces (oligonucléotides d'amorce) avec les sections d'extrémité des chaînes strictement spécifiques choisies pour la multiplication du fragment d'ADN;
    • Étape III - achèvement de la chaîne du fragment d'ADN en utilisant une ADN polymérase thermostable.

    Pour une amplification in vitro, il doit exister des molécules modèles d'ADN. quatre types de désoxynucléosides triphosphates (nucléotides) contenant les bases azotées correspondantes: adénine (A), thymine (T), guanine (D), cytosine (C); oligonucléotides de semences synthétisés artificiellement (amorces) constitués de 18 à 20 paires de bases; ADN polymérase thermostable, ayant une température optimale de 68-72 ° C, et ions de magnésium.

    La spécificité de la PCR dépend du choix du fragment d'ADN. Conformément à cela, des oligonucléotides de graines de flanc sont synthétisés. La spécificité de l'hybridation et de l'achèvement de la chaîne d'ADN est déterminée par le principe de complémentarité des paires de bases azotées suivantes: adénine-thymine, guanine-cytosine.

    Pour déterminer le génome du complexe mycobacterium tuberculosis, la cible d'amplification la plus efficace dans la plupart des systèmes de test était le fragment d'ADN IS6110 qui, dans la plupart des souches de Mycobacterium tuberculosis, présente un nombre significatif (10 à 20) de répétitions dans le génome, ce qui confère à la spécificité une sensibilité élevée de l'analyse. Dans le même temps, des souches de Mycobacterium tuberculosis présentant un petit nombre de répétitions ou l’absence d’un fragment IS6110 ont été décrites.

    Isolement de molécules d'ADN à partir d'un échantillon biologique

    Pour effectuer une PCR, les molécules d'ADN de l'agent pathogène doivent être isolées à partir d'un matériel biologique dans un volume minimal, avec une quantité minimale d'ADN non insolvant et divers inhibiteurs de l'enzyme - ADN polymérase.

    La préparation des échantillons doit être effectuée dans des conditions empêchant la contamination croisée des échantillons à l'étude par des molécules d'ADN sécrétées. Pour cela, il est nécessaire de prétraiter la pièce avec une lumière ultraviolette, les sols et les surfaces de travail des tables et des appareils - solutions contenant du chlore. Il est également nécessaire d’utiliser des gants propres, des tubes jetables et des embouts pour pipettes automatiques.

    Pour isoler l'ADN de Mycobacterium tuberculosis à partir d'échantillons cliniques (liquide céphalo-rachidien, lavage bronchique) ne contenant pas un grand nombre de leucocytes, de débris cellulaires ou de sels, il suffit de centrifuger l'échantillon à 3-4 000 tours par minute, ajoutez 20-30 μl de solution à 2% au sédiment Triton X-100 et réchauffer à 90 ° C pendant 30 min.

    Pour la préparation des échantillons d'expectorations, une dilution efficace est requise. Pour cela, une solution d'hydroxyde de sodium à 4% et de N-acétyl-L-cystéine (NALC) à raison de 50 à 80 mg par échantillon sont utilisées, en fonction de la viscosité de l'échantillon. La solution de NALC doit être préparée ex tempore ou la poudre de NALC peut être ajoutée sous forme sèche directement à l'échantillon. Après dilution, les échantillons doivent être centrifugés pendant 15 minutes à 3,5 000 à 4 000 tours par minute (3 000 g) dans des tubes de 50 ml avec des bouchons à vis. dans les mêmes conditions que celles recommandées pour la préparation des expectorations avant le semis.

    Pour l'extraction de l'ADN des sédiments, une méthode basée sur l'utilisation d'une solution 5-6 molaire d'isothiocyanate de guanidine en tant que réactif de lyse et de molécules d'ADN sorbant de particules de silice microporeuses («terre de diatomée») est plus couramment utilisée. Les substances non spécifiques, y compris les inhibiteurs éventuels, sont ensuite lavées dans une solution 2,5 molaire d’isothiocyanate de guanidine et d’éthanol, après quoi les molécules d’ADN sont désorbées dans de l’eau, et ces échantillons sont utilisés pour la PCR. Pour simplifier la technologie d'extraction de l'ADN, la «terre de diatomée» est souvent remplacée par des microparticules magnétiques revêtues de silice. En même temps, au lieu de centrifuger, un tube magnétique spécial pour tubes à microtest est utilisé pour précipiter les particules.

    En Russie, une méthode originale de séparation immunomagnétique des mycobactéries a été mise au point, suivie de l'extraction de l'ADN du pathogène. Pour la séparation immunomagnétique de Mycobacterium tuberculosis, on utilise des ferroparticules de 3 à 5 µm revêtues d’oxyde de silicium, auxquelles des anticorps polyclonaux (de lapin) contre les mycobactéries de la tuberculose sont fixés par liaison chimique. Après la lyse alcaline, les échantillons d'expectoration sont neutralisés avec une solution acide de Tris-HCl et incubés avec un sorbant immunomagnétique. Ensuite, les particules d'immunopole sont collectées à l'aide d'un bâton magnétique à pointe remplaçable, transférées dans un microvial, précipitées. 20-30 µl d'une solution de Triton X-100 à 2% sont appliqués et chauffés pendant 30 minutes à 90 ° C. Le surnageant est utilisé comme matrice d'ADN pour l'analyse PCR.

    Un problème difficile est l'isolement de l'ADN de Mycobacterium tuberculosis à partir d'échantillons de biopsie. Pour la lyse de la biopsie, on utilise l'enzyme - protéinase K à une concentration finale de 200-500 mg / l à une température de 56 o avec pendant la nuit. Ensuite, attribuez l'une des méthodes connues. Un excès d'ADN non spécifique dans l'analyse PCR d'échantillons de biopsie sert souvent à inhiber la réaction, ce qui nécessite une extraction répétée de l'ADN.

    Méthodes de détection des résultats

    Après l'achèvement de la réaction, les fragments d'ADN de l'agent pathogène amplifiés sont identifiés en utilisant divers procédés.

    Une méthode bien connue d'électrophorèse sur gel. En même temps, le fragment d'ADN obtenu est identifié par un contrôle positif, contenant le fragment d'ADN spécifique souhaité, ou par une taille précédemment connue (nombre de paires de nucléotides) du fragment, qui est déterminée à l'aide d'un marqueur moléculaire standard.

    En présence d'un colorant spécifique, le bromure d'éthidium, incorporé dans l'ADN double brin. Le fragment d'ADN synthétisé est détecté comme une bande rougeoyante sous l'action de l'ultraviolet.

    La taille du fragment d'ADN, déterminée par électrophorèse en fonction de la distance depuis le début, doit correspondre à un marqueur de poids moléculaire connu ou à un contrôle positif.

    D'autres méthodes de détermination des résultats de la PCR reposent sur l'hybridation de produits de PCR à chaîne unique avec une sonde d'ADN marquée à la biotine qui leur est complémentaire, suivie d'une détection par réaction enzymatique, par exemple, par liaison à la biotine d'un conjugué streptavidine-phosphatase alcaline.

    Sur la base de ce type de détection, des analyseurs de PCR ont été créés, dans lesquels la détection des résultats de la PCR est effectuée automatiquement à la suite de la lecture de la densité optique dans les échantillons après une réaction enzymatique.

    Les inconvénients de ces méthodes résident dans les possibilités de contamination intralaboratoire avec des fragments assez courts de molécules d'ADN. Lorsqu'elles sont libérées dans les échantillons récemment étudiés, ces molécules deviennent la matrice de la PCR et conduisent à des résultats faussement positifs.

    À cet égard, afin d'éviter les résultats faussement positifs, des règles strictes sont définies pour la séparation et l'isolement des locaux: pour l'isolement de l'ADN à partir d'échantillons biologiques; locaux pour la détection des résultats (électrophorèse) de la zone propre. Ces salles constituent une zone de contamination probable. Une autre zone isolée est une salle blanche pour l'introduction d'échantillons d'essai d'ADN dans des éprouvettes contenant le mélange réactionnel pour la PCR. Enfin, on suppose que l’appareil principal - l’amplificateur d’ADN - doit être déplacé dans une pièce séparée, éventuellement un bureau.

    Pour éviter la contamination avec les produits de réactions précédentes - avec les ampicons, certains systèmes de test PCR à la place du désoxynucléoside thymidine contiennent du désoxynucléosidurure, qui est inséré à la place dans la position correspondante lors de la synthèse de la chaîne in vitro, à savoir. la thymine base azotée, qui est présente dans l'ADN natif, est remplacée par l'uracile. L’ADN glycosylase d’Uracil, ajouté au mélange réactionnel dans le matériau à analyser, ne détruit que les fragments contaminants avec la désoxyuridine, mais pas l’ADN natif analysé. contenant de la désoxythymidine. Un chauffage ultérieur à 94 ° C inactive cette enzyme et n'interfère pas avec l'amplification par PCR.

    Il existe un système de test basé sur l'amplification isothermique de l'ARNr, pour lequel la transcription inverse et la synthèse des molécules d'ADN sont effectuées en premier. qui, à son tour, est un modèle pour la synthèse ultérieure de molécules d'ARN. Les amplicons d'ARN sont détectés à l'aide d'une sonde à ADN colorée à l'acridine lors de l'hybridation dans la solution du tube de réaction. Cette méthode, outre sa grande sensibilité, présente l’avantage d’effectuer l’analyse dans un seul tube à essai, ce qui évite la contamination. Selon les auteurs, la sensibilité de cette méthode dans les échantillons respiratoires atteint 90% avec une spécificité de 99-100%.

    De nouvelles méthodes de détection sont mises en œuvre dans la PCR en temps réel. Ces méthodes se distinguent principalement par le fait que la PCR et la détection de ses résultats sont effectuées simultanément dans un tube fermé. Cela simplifie non seulement technologiquement la méthode d'analyse, mais empêche également la contamination des salles de laboratoire et des échantillons de test avec des produits antérieurs à la PCR.

    Dans la PCR en temps réel, la détection des résultats est due à la fluorescence résultant de l'hybridation d'une sonde d'ADN fluorogénique avec un fragment d'ADN spécifique amplifié lors de la PCR. La structure des sondes d'ADN fluorogéniques est construite de telle sorte que le marqueur fluorescent soit libéré à la suite d'une réaction enzymatique ou ne soit éloigné de la molécule d'extincteur de fluorescence que lors d'une hybridation spécifique avec la molécule d'ADN souhaitée amplifiée lors de la PCR. Avec l'augmentation du nombre de molécules hybridées avec une sonde, l'augmentation de la fluorescence à un niveau détectable est proportionnelle au nombre de molécules du produit amplifié. Comme le nombre de molécules de fragments d'ADN est doublé au cours de chaque cycle de PCR, le nombre de cycles à partir duquel la fluorescence est déterminée et augmenté est inversement proportionnel au nombre de molécules d'ADN de l'échantillon d'origine. Si plusieurs concentrations différentes connues des molécules du fragment d'ADN correspondant de Mycobacterium tuberculosis sont introduites dans la réaction en tant que calibrateur, le nombre de génomes d'ADN dans le matériel étudié peut être calculé à l'aide d'un programme informatique.

    Chaque échantillon standard est dupliqué. Un critère quantitatif est le nombre minimum de cycles de PCR requis pour le début et la croissance de la fluorescence détectée. L'abscisse est le nombre de cycles; l'axe des ordonnées est la valeur de la fluorescence. La concentration en ADN est inversement proportionnelle au nombre de cycles nécessaires à l'apparition de la fluorescence. Dans les fenêtres de la colonne de droite (21-32), les numéros de cycle des concentrations respectives sont marqués. Différences entre les concentrations 10 fois supérieures des fragments d’ADN 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 cycles. Pour deux patients, la concentration en fragments IS6110 était d'environ 10 3 / ml et 10 4 / ml. Compte tenu du nombre de répétitions (6-20) des fragments analysés dans le génome de Mycobacterium tuberculosis, le nombre de mycobactéries dans les échantillons cliniques est d'environ 100 et 1000 cellules, respectivement.

    Utilisation de la PCR dans le diagnostic de la tuberculose

    La méthode PCR est la plus utilisée pour le diagnostic accéléré de la tuberculose - la détection de Mycobacterium tuberculosis dans des échantillons cliniques: expectorations. lavages bronchiques, exsudat pleural, urine, liquide céphalo-rachidien, ostéolyse ponctuée, aspirations de l'appareil génital féminin et divers échantillons de biopsie. Dans une étude menée aux Pays-Bas sur environ 500 échantillons d'expectorations et de prélèvements bronchiques chez 340 patients présentant un diagnostic confirmé de tuberculose pulmonaire, la sensibilité comparative de la PCR, de la culture et de la microscopie à frottis a été étudiée. La sensibilité de l'analyse était respectivement de 92,6,88,9 et de 52,4%. Dans ce cas, la spécificité de toutes les méthodes était d'environ 99%.

    Une comparaison a été faite de l'efficacité de détection de Mycobacterium tuberculosis par les méthodes de microscopie de frottis, l'ensemencement sur du milieu de Lowenstein-Jensen, le système de test WASTES et l'analyse par PCR. La PCR a montré une sensibilité de 74,4%, la microscopie - 33,8%, l'ensemencement sur un milieu dense - 48,9% et les DÉCHETS - 55,8%. Le temps de détection moyen des semis sur le milieu Levenshtein-Jensen est de 24 jours. DÉCHETS - 13 jours, PCR - 1 jour.

    Les possibilités d'utiliser la PCR comme méthode sensible et rapide de suivi de l'efficacité du traitement de la tuberculose sont également discutées.

    La détection de l'ADN de Mycobacterium tuberculosis par PCR avec une chimiothérapie efficace est déterminée pour une période plus longue: 1,7 mois en moyenne par rapport à la sécrétion de bactérie détectée par microscopie à fluorescence et 2,5 mois par rapport à l'examen bactériologique.

    Diagnostic de la tuberculose extrapulmonaire

    La valeur de la PCR en tant que méthode sensible est particulièrement intéressante pour les formes extrapulmonaires, car c’est sous ces formes que les méthodes de radiographie clinique et les méthodes bactériologiques traditionnelles pour la détermination de Mycobacterium tuberculosis dans des matériels de diagnostic sont inefficaces.

    Lors de l'examen des échantillons d'urine, les résultats de l'analyse PCR étaient positifs chez 16 des 17 patients atteints de tuberculose urinaire active et négatifs chez 4 patients atteints de tuberculose rénale inactive et 39 patients atteints de maladies non tuberculeuses du système urinaire.

    L’efficacité de l’analyse PCR a été démontrée dans l’étude des aspirations de moelle osseuse chez des patients présentant une fièvre dont la genèse n’était pas claire et qui soupçonnaient le caractère tuberculeux de la maladie. Pour le diagnostic de la lymphadénite tuberculeuse chez les enfants, 102 spécimens prélevés par aspiration ponctuelle et par biopsie de 67 enfants présentant une suspicion de lymphadénite tuberculeuse ont été étudiés. Des résultats positifs ont été obtenus: par PCR en temps réel - 71,6%. microscopie à fluorescence - 46,3%. études sur la culture - 41,8%. Dans une étude portant sur 50 biopsies de ganglions lymphatiques chez des patients atteints de maladie des griffures du chat, tous les résultats étaient négatifs. Ainsi, une spécificité de 100% de l'analyse PCR a été démontrée. Dans le même travail, avec la biopsie de ponction des ganglions lymphatiques, la possibilité de détecter M. avium a été montrée.

    Le diagnostic de la tuberculose génitale féminine avec infertilité est connu pour être l'un des problèmes de diagnostic les plus difficiles. Une étude utilisant la PCR de biopsies endométriales, d'aspirations endométriales et d'échantillons liquides de l'espace de Douglas chez 14 (56%) des 25 patients examinés par laparoscopie avec suspicion de tuberculose a donné des résultats positifs. En utilisant la microscopie de frottis et les études de culture, 1 et 2 ont été obtenus, respectivement, des résultats positifs. Ces cas étaient également positifs à la PCR. La plupart des résultats positifs pour la PCR concernaient des cas présentant des signes caractéristiques de tuberculose selon l'examen histologique; moins si suspecté d'avoir la tuberculose selon la laparoscopie. Une seule analyse PCR positive a été obtenue en l'absence de données laparoscopiques pour la tuberculose.

    Lors du diagnostic des formes extra-pulmonaires de tuberculose, les cliniciens se posent souvent des questions sur la possibilité de détecter l'agent pathogène dans le cadre d'une étude PCR sur des échantillons de sang. Les données de la littérature indiquent que la détection de l’ADN de Mycobacterium tuberculosis à partir d’échantillons de sang est possible avec des formes avancées d’infection à VIH. L'ADN de Mycobacterium tuberculosis n'a été détecté qu'en cas de tuberculose généralisée de divers organes chez des patients transplantés du rein et sous immunosuppression.

    Identification des espèces de mycobactéries

    La méthode PCR peut être très efficace pour l'identification rapide du complexe de Mycobacterium tuberculosis et de certains types de mycobactéries non tuberculeuses après leur croissance initiale. Dans ce cas, l'utilisation de la PCR peut permettre d'économiser 7 à 10 jours pour l'identification culturelle ultérieure d'un résultat positif. La recherche par PCR est techniquement très simple, car elle ne nécessite pas de préparation complexe d’échantillons de matériel clinique pour atteindre une sensibilité élevée. Dans l'étude de 80 cultures positives dans un tel système de test (MB VasT. De la société Organon), tous les résultats positifs de l'analyse PCR étaient strictement spécifiques et ont été réalisés pendant une journée. Pour identifier d'autres types de mycobactéries, lorsqu'ils sont obtenus en culture, l'ADN de l'agent pathogène s'hybride avec des sondes d'ADN spécifiques marquées à l'acridine, et les souches sont détectées par l'apparition d'une chimioluminescence à l'aide d'un chimiluminomètre ou sur des bandes de nitrocellulose avec évaluation visuelle après hybridation. Avec ce kit, un nombre limité d'espèces sont identifiées: le complexe Mycobacterium tuberculosis. M. avium, le complexe M. avium, M. kansasii et M. gordonae.

    A.Telenti et al. ils ont également mis au point une méthode relativement simple et peu coûteuse d'identification des espèces de mycobactéries cliniquement importantes, basée sur la PCR et le traitement ultérieur par deux enzymes de restriction (enzymes qui ont la propriété de couper la molécule d'ADN à des points spécifiques). Lorsque cela est amplifié, le fragment d'ADN. codant pour la protéine de choc thermique (65 kDa), après quoi le fragment d’ADN de 439 paires de nucléotides obtenu par PCR est traité séparément par deux enzymes - Bste II et Hae III. Ensuite, en utilisant l'électrophorèse sur gel d'agarose, les deux produits obtenus sont analysés, en déterminant leur taille (nombre de paires de nucléotides) en utilisant un ensemble de fragments d'ADN standard (marqueurs d'ADN moléculaire) d'une longueur de 100 à 1000 paires de nucléotides. Dans chacune de certaines espèces (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum), on trouve 2 ou 3 fragments d'ADN de tailles différentes pour chaque enzyme de restriction. La combinaison de fragments d'ADN de tailles différentes obtenues permet la différenciation de ces espèces entre elles.

    La technologie des micropuces à ADN biologique est en cours de développement. qui aidera à identifier plus de 100 types de mycobactéries dans une étude.

    L'identification des espèces peut également être réalisée en amplifiant par PCR la région variable de l'ARNr 16S, puis en séquençant les amplicons par rapport à la structure primaire correspondante, ce qui permet l'identification de plus de 40 espèces de mycobactéries.

    En utilisant la PCR, l'identification des espèces peut également être réalisée dans le complexe de mycobacterium tuberculosis, y compris la différenciation de M. bovis et de M. bovis BCG. Pour cela, la présence ou l'absence de certains gènes dans les régions génomiques de RD1 est analysée. RD9 et RD10. RD1 est absent chez M. bovis BCG, mais est présent dans les espèces virulentes, y compris M. bovis.

    Détermination de la sensibilité aux médicaments de Mycobacterium tuberculosis par PCR

    Les tâches des méthodes de génétique moléculaire permettant de déterminer la sensibilité ou la résistance d'un médicament à Mycobacterium tuberculosis sont réduites à l'identification de mutations dans certaines séquences de nucléotides de gènes connus. Les principales méthodes reposent soit sur la lecture directe (séquençage) de ces séquences après amplification, soit sur l’hybridation de fragments d’ADN marqués à la biotine amplifiés lors de la PCR avec des sondes ADN. Les deux variantes suggèrent l'identification de substitutions dans les séquences nucléotidiques qui, lors de l'utilisation de sondes ADN, conduisent à l'absence ou à l'hybridation défectueuse sur la membrane de nitrocellulose en utilisant un conjugué enzyme (streptavidine-phosphatase alcaline) - la méthode LIPA-Rif-TB.

    La méthode de mesure de la fluorescence dans les sondes d'ADN fixées localement sur des microsites qui sont complémentaires aux mutations connues des régions amplifiées par PCR de gènes responsables de la sensibilité ou de la résistance à un médicament est appelée la méthode des micropuces. L'algorithme de base pour mener cette étude est le suivant. Après avoir isolé l'ADN d'un échantillon clinique ou d'une culture de mycobactéries, il est nécessaire d'effectuer une PCR pour amplifier les fragments correspondants du gène gRV responsable de la sensibilité du médicament à la rifampicine, ou des gènes katG et inhA codant pour les protéines mycobactériennes responsables de la sensibilité à l'isoniazide. Les résultats de la PCR sont évalués en utilisant une électrophorèse sur gel d'agarose, qui confirme la préparation des fragments d'ADN correspondants de la longueur souhaitée. Ceci est suivi par le 2ème cycle de PCR pour l'introduction d'un marqueur fluorescent dans l'ADN. Les résultats de la PCR sont à nouveau confirmés par électrophorèse sur gel. Après cela, l'hybridation (incubation pendant une nuit) est effectuée puis le matériel obtenu est lavé sur une biopuce, constituée d'un grand nombre de courtes chaînes d'ADN (sondes) fixées sur une petite plaque de verre, complémentaires des séquences nucléotidiques de Mycobacterium tuberculosis sensible aux médicaments, aux points de mutations possibles. ainsi que des séquences mutantes responsables de la résistance aux médicaments. La disposition des sondes d'ADN sur la plaque est strictement déterminée et le niveau de fluorescence observé lors de l'hybridation pour déterminer le résultat à l'aide d'un lecteur spécial est défini. À cet égard, les résultats de l'analyse sont déterminés à l'aide d'un programme informatique spécial.

    Ces dernières années, des méthodes alternatives de détermination de la sensibilité aux médicaments de Mycobacterium tuberculosis, basées sur la technologie de PCR en temps réel, ont été développées, permettant à ces études d'être conduites en mode tube fermé.

    Sur la fig. 13-13 présente le résultat de l'analyse de cultures cliniques de Mycobacterium tuberculosis lors de la détermination de la résistance d'un médicament à la rifampicine à l'aide de la PCR en temps réel: 218 - échantillon de contrôle (sensible à la rifampicine); 93 - contrôle positif pour la mutation de Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - contrôle positif pour la mutation TCG-TTG de Ser-Leu; 162-322 - échantillons expérimentaux. Résultat du calcul des courbes d’amplification cinétique pour 4 canaux: canal 1: 393 - contrôle positif pour la mutation Ser-Trp TCG-TGG; canal 2: 4482 - contrôle positif pour la mutation Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - échantillons expérimentaux; canal 4: courbes d'amplification cinétique de tous les échantillons impliqués dans l'expérience. Réaction d'amplification de contrôle positif. Conclusions: les résultats de l'analyse ont révélé les mutations suivantes déterminant la résistance à la rifampicine: dans les échantillons 162 163 172 295 - Ser-Leu TCG-TTG. Le même principe est utilisé pour déterminer la résistance des médicaments à l'isoniazide pour les gènes katG et inhA, qui déterminent les mutations les plus fréquentes.

    Identification de la souche de Mycobacterium tuberculosis

    La méthode la plus étudiée d’identification de la souche de Mycobacterium tuberculosis est une technologie appelée polymorphisme de la longueur des fragments de restriction (RFLP, ou RFLP dans la version anglaise), qui repose sur la fragmentation de l’ADN de Mycobacterium tuberculosis avec l’enzyme Pvu II et sur l’hybridation ultérieure des fragments obtenus avec des séquences spécifiques sur l’ADN. son élément de répétition est IS6110. La variabilité intraspécifique est réalisée en raison du nombre différent de répétitions d'IS6110 et de leur emplacement sur l'ADN. ainsi que la diversité des distances entre certains points d'attaque de l'enzyme restrictase (sites de restriction) et l'élément IS6110. Cette technologie est très complexe et prend du temps. Après traitement de l'ADN isolé de la culture de Mycobacterium tuberculosis avec une enzyme de restriction, une électrophorèse sur gel est effectuée, puis des fragments d'ADN de différentes longueurs sont transférés sur la membrane de nitrocellulose, hybridés avec des fragments IS6110, et les résultats sont détectés au moyen d'une réaction enzymatique. Le motif spécifique résultant de bandes caractérise l'ADN d'une souche spécifique de Mycobacterium tuberculosis. L'analyse informatique a révélé l'identité ou l'affinité des souches. Bien que la méthode RFLP soit la plus discriminante, c’est-à-dire révèle le plus grand nombre de différences entre les souches analysées et est inefficace avec un petit nombre (moins de 5) de répétitions IS6110 observées dans certaines souches. Sur la fig. 13-14 présente les résultats du typage RFLP des souches.

    Une alternative peut être la méthode de spoligotypage (spoligotypage) - une analyse du polymorphisme de séquences d'ADN espaceur - intermédiaire entre les répétitions directes de la région DR. Lors de la réalisation du spoligotypage des souches, la PCR est réalisée avec des amorces limitant la région DR, après quoi des fragments de différentes longueurs se forment, lesquels s'hybrident avec des régions intermédiaires variables de l'ADN. L'analyse des séquences d'espacement de la région DR est présentée. selon les chercheurs, il est plus simple, plus productif et convient au criblage primaire de souches et à une analyse épidémiologique préalable, ainsi qu’à l’étude de matériel directement clinique.

    De toute évidence, une méthode plus efficace et plus accessible sur le plan technologique est VNTR (abréviation de mots anglais), ou une méthode permettant de déterminer le nombre variable de répétitions en tandem exactes dans l'ADN de Mycobacterium tuberculosis. Cette méthode est basée uniquement sur l'utilisation de la PCR et ne nécessite aucune manipulation supplémentaire. Étant donné que le nombre de répétitions en tandem dans différentes souches et dans différents locus est différent, des fragments de différentes tailles sont déterminés et analysés sur l'électrophoregramme résultant des produits de PCR. Selon les chercheurs, le VNTR permet d’obtenir une plus grande discrimination des souches que la méthode RFLP.

    Ces dernières années, la prolifération des souches de Mycobacterium tuberculosis de la famille W-Beijing (parfois appelées souche de Beijing), qui sont largement résistantes aux médicaments, a fait l'objet d'une attention particulière.

    Exigences de base pour la qualité des études de biologie moléculaire

    Documents réglementaires de base pour la PCR

    Ordonnances du Ministère de la santé de Russie: n ° 45 du 7 février 2000. n ° 109 du 21 mars 2003. n ° 64 du 21 février 2000. Orientations méthodiques: 1.3.1888-04 "Organisation du travail pendant les études PCR de matériel infecté par des agents pathogènes biologiques agents des groupes de pathogénicité III-IV "; 1.3.1794-03 "Organisation du travail pendant les études PCR du matériel infecté par des micro-organismes des groupes de pathogénicité I-II". 2003; 3.5.5.1034-01 "Désinfection du matériel d’essai infecté par des bactéries des agents pathogènes des groupes I à IV lors de l’utilisation de la méthode PCR", 2001. Appendice 11 de l’Instruction concernant les méthodes unifiées de recherche microbiologique pour la détection, le diagnostic et le traitement de la tuberculose.

    Le staff

    Les docteurs en diagnostic de laboratoire clinique, les bactériologistes, les virologues, les biologistes du laboratoire de diagnostic clinique, ainsi que les spécialistes de la médecine ayant acquis la spécialisation et une formation avancée dans les conditions prescrites peuvent effectuer des études de biologie moléculaire.

    Laboratoire local

    Les installations de laboratoire suivantes sont nécessaires:

    • La zone de traitement des échantillons est un laboratoire adapté au travail avec des agents infectieux des groupes de pathogénicité III à IV, conformément aux directives méthodologiques 13.1888-04.
    • La zone de préparation des mélanges réactionnels PCR - la salle de laboratoire, qui offre une protection contre la contamination interne du laboratoire - la zone "propre".
    • • Si une électrophorèse ou une hybridation est utilisée pour analyser les produits de PCR. la salle de laboratoire dans laquelle les fragments d’ADN propagés sont extraits du tube d’amplification et, par conséquent, peuvent être libérés dans l’environnement, conformément aux exigences des laboratoires de PCR (directives 1.3.1794-03, 1.3.1888-04), doit être complètement isolé des locaux indiqués dans les paragraphes précédents. Le mouvement de la zone d'électrophorèse à la zone de traitement des échantillons et à la zone «propre» de tout personnel, équipement, matériaux et objets, ainsi que du transfert d'air à travers le système de ventilation ou à la suite de courants d'air doit être exclu. Cette zone n'est pas requise pour la détection fluorimétrique des produits de PCR.
    • La salle de documentation et de traitement des résultats est équipée d'ordinateurs et du matériel de bureau nécessaire. Des équipements peuvent être situés dans cette salle pour détecter les produits de PCR sans ouvrir le tube. - détecteurs PCR et thermocycleurs fluorescents pour la PCR en temps réel.

    Les exigences sanitaires et épidémiologiques pour le traitement primaire des expectorations sont similaires aux exigences microbiologiques standard pour travailler avec les mycobactéries de la tuberculose.

    Ensemble complet d'équipements de laboratoire pour le diagnostic PCR

    L'emballage de laboratoire comprend l'équipement pour les salles suivantes.

    • La salle de préparation des échantillons contient les équipements suivants: Classe de protection laminaire II "SP-1.2": thermostat à semi-conducteur avec bouchon chauffant pour tubes de type Eppendorf; microcentrifugation à 13 000 tr / min; centrifugeuse ("Vortex"); un réfrigérateur avec une plage de température de -20 ° C à +10 ° C; pipettes à volume variable de la série Proline; pompe avec piège à ballon OM-1; support de pipette; trépied de travail 200x0,5 ml; trépied lieu de travail 50x1,5 ml; portoirs pour tubes de rangement 80x1,5 ml;
    • local pour la préparation du mélange réactionnel: chambre de protection PCR-box («Laminar-C. 110 cm); centrifugeuse - "Vortex"; pipettes à volume variable de la série Professional; support de pipette; trépied de travail 200x0,2 ml; portoirs pour tubes de rangement 80x1,5 ml; un réfrigérateur avec une plage de température de -20 ° C à + 10 ° C;
    • salle d'électrophorèse: une chambre pour l'électrophorèse horizontale; alimentation électrique; transilluminateur;
    • Amplificateur d'ADN ou analyseur d'acides nucléiques (PCR en temps réel) avec un ordinateur et un logiciel; peut être placé dans n'importe quelle pièce libre. Si vous utilisez la technologie PCR en temps réel. salle d'électrophorèse n'est pas nécessaire.

    Contrôle de qualité externe

    Pour être sûr d'obtenir des résultats objectivement fiables, les laboratoires doivent participer au système d'évaluation externe de la qualité de la recherche en laboratoire.

    Les participants au système de contrôle de la qualité reçoivent; 12 ampoules avec des suspensions lyophilisées de cellules bactériennes, dont deux contiennent E. coli, E. coli, 3 ampoules contenant Mycobacterium tuberculosis (souche avirulente) à une concentration de 10 2 / ml; 3 ampoules contenant des cellules d'une souche similaire à une concentration de 10 4 / ml; 2 ampoules de mycobactéries non tuberculeuses, M. avium-intracellulare et M. kansasii, à une concentration de 10 5 / ml.

    Les tests distribués pour l'évaluation externe de la qualité sont pré-testés dans deux laboratoires indépendants dotés d'une vaste expérience dans ce domaine.